溶菌多糖類モノオキシゲナーゼ活性の特性化のためのMALDI-TOF MSとUHPLC-ESI-MSの組み合わせ【JST・京大機械翻訳】

Silva Caio de Oliveira Gorgulho; Teixeira Tallyta Santos; Rodrigues Kelly Barreto; Souza Amanda Araujo; Monclaro Antonielle Vieira; Mendes Thais Demarchi; Ribeiro Jose Antonio de Aquino; Goncalves de Siqueira Felix; Favaro Leia Cecilia de Lima; Abdelnur Patricia Verardi

文献

J-GLOBAL ID：202002289634811896 整理番号：20A0785628

溶菌多糖類モノオキシゲナーゼ活性の特性化のためのMALDI-TOF MSとUHPLC-ESI-MSの組み合わせ【JST・京大機械翻訳】

Combination of MALDI-TOF MS and UHPLC-ESI-MS for the characterization of lytic polysaccharide monooxygenase activity

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資料名：
巻： 12 号： 2 ページ： 149-161 発行年： 2020年
JST資料番号： W2324A ISSN： 1759-9660 CODEN： AMNECT 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：イギリス (GBR) 言語：英語 (EN)

溶菌多糖モノオキシゲナーゼ(LPMO)は,酸化機構によりセルロースのような難分解性多糖類を分解する能力により,高い生物工学的関心の酸化還元酵素である。LPMOの特性化は,還元末端(C1位置)で酸化された天然オリゴ糖(非酸化)およびオリゴ糖,非還元末端(C4位置),または両方の末端を含む種々の触媒生成物を生成するので,異なる重合度を有するために挑戦的である。さらに,酸化生成物はそれらの水和型と平衡して存在し,それらの同定をさらに複雑にした。これらすべての可能な酸化オリゴ糖の可能な形態とこれらの生成物の低濃度のための市販分析標準の欠如は,酸化生成物のプロファイルを同定できる高度な質量分析技術に依存するLPMO機能特性化を行う。ここでは,MALDI-TOF MSと親水性相互作用UHPLC-ESI-MSの組合せに基づくセルロース活性LPMOの特性化のための新しいアプローチを提案し,最適化した。Trichoderma reeseiからのLPMO TrAA9Aをモデル酵素として用い,MS法を開発し試験した。MALDI-TOF MSおよびUHPLC-ESI-MS法は,LPMOによるセルロース処理後に生成したそれらの天然対応物と同様に,推定C1,C4およびC1/C4酸化セロオリゴ糖を同定することができ,それらはタイプI(C1-酸化剤),タイプII(C4-酸化剤)およびタイプIII(C1-およびC4-酸化剤)LPMOを特性化することを可能にした。さらに,MALDI-TOF MSはより高い重合度(DP3-DP10)を有するオリゴ糖を検出することができるので,両方法は相補的であったが,UHPLC-ESI-MSはより小さなオリゴ糖(DP1-DP5)の評価を可能にした。両方法の併用はLPMO触媒生成物の包括的記述を提供する。Copyright 2020 Royal Society of Chemistry All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

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液体クロマトグラフィー , 質量分析 , 蛋白質・ペプチド一般 , 有機化合物の物理分析

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