抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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背景:Ciliaは,ホモサピーンのような複雑な多細胞生物に藻類から保存されたアクチンに基づく細胞突起である。気管支樹の呼吸運動性繊毛線上皮細胞は,同期性,異時性波,移動吸入汚染物質,および病原体のcephala死にでった。慢性閉塞性肺疾患(COPD)のような後天性疾患に対する原発性毛様体運動障害(PCD)のような先天性疾患における役割は進化し続けている。本研究では,ヒト鼻上皮細胞とマウス気管細胞をin vitroで再繊毛するために最適化したプロトコルを概説した。このプロトコルを用いて,既知の繊毛遺伝子をノックダウンし,Notch,N-[N-(3,5-ジフルオロフェンアセチル)-L-アラニル]-S-フェニルグリシン t-ブチルEster(DAPT)の小分子阻害剤を用いて,これらのプロトコルの妥当性を示すための繊毛形成に及ぼすこれらの影響を評価した。方法:Tracheasを野生型,成体C57B6マウスから採取して,ラット尾コラーゲン被覆ウェル上で静止培養において合流に増殖した上皮細胞を消化し,脱落した。合流に達すると,コラーゲンは消化され,細胞は細胞を再繊毛するために懸濁培養プロトコルを配置した。この懸濁培養プロトコルを用いて,siRNA遺伝子ノックダウンを用いて気道繊毛形成に必要な遺伝子機能を分析した。繊毛構造蛋白質であるダイニン軸索の重鎖5(Dnah5)のノックダウンを免疫染色により確認した。マウス気管細胞を,繊毛形成に対する効果および用量反応を評価する目的で,Notchの阻害剤,DAPTの用量を変えて懸濁液中で処理した。次に,最適用量を,ヒト鼻上皮細胞の再繊毛に使用した。結果:Foxj1のsiRNAノックダウンは繊毛形成を阻害し,運動性繊毛のマスター調節因子としての役割と一致した。Dnai1とDnah5のノックダウンは不動繊毛をもたらし,中心体増幅を調節することが知られている中心体蛋白質であるCand1ノックダウンは気道繊毛形成を阻害した。Dnah5ノックダウンは,この蛋白質に対する繊毛の免疫染色の有意な低下により確認した。DAPTによるガンマセクレターゼの阻害によるNotchシグナリングの阻害は繊毛の割合を増強し,マウスとヒト気道上皮の両方でより高い頻度でビートする長い繊毛をもたらした。結論:ヒト鼻上皮とマウス気管組織の両方に適合するための既存の再繊毛プロトコルの修正は,既知の繊毛関連遺伝子のノックダウンが予想される効果を有することを示した。さらに,DAPTを用いて気道上皮の再繊毛を有意に改善する最適投与量を示した。繊毛の長さと機能がCOPDで著しく損なわれると,これらの知見は更なる探索のための興味深い道を開く。Copyright 2021 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
