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J-GLOBAL ID：202102227595775566   整理番号：21A0546356

植物における蛋白質分析のための汎用ナノルシフェラーゼツールキットおよび最適化ゲル検出法【JST・京大機械翻訳】

A versatile nanoluciferase toolkit and optimized in-gel detection method for protein analysis in plants

著者 (7件)： Li Hong (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Hubei Key Laboratory of Plant Pathology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Wu Caiyun (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Hubei Key Laboratory of Plant Pathology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Du Manman (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Hubei Key Laboratory of Plant Pathology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Chen Yache (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Hubei Key Laboratory of Plant Pathology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Hou Xin (State Key Laboratory of Hybrid Rice, Wuhan University, Wuhan, China) ,  Yang Yinong (Department of Plant Pathology and Environmental Microbiology, The Pennsylvania State University, State College, PA, USA) ,  Xie Kabin (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Hubei Key Laboratory of Plant Pathology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China)
資料名： Molecular Breeding  (Molecular Breeding)
巻： 41  号： 2  ページ： 13  発行年： 2021年 
JST資料番号： W0927A  ISSN： 1380-3743  CODEN： MOBRFL  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 遺伝子機能の分割は,遺伝子発現をモニターするための洗練されたツールを必要とする。エピトープペプチド及び蛍光蛋白質タグによる遺伝子標識は,タグ特異的抗体及びウェスタンブロット法及び免疫検出段階によるウェスタンブロット法を用いた蛋白質発現を研究するためのルーチン法である。ナノルシフェラーゼ(NanoLuc)は極めて明るい生物発光を示し,感受性遺伝子レポーターとして工学されている。その小さなサイズと高い生物ルミネセンス活性により,ナノLucはゲルマトリックス(ゲル内検出)中の標識蛋白質の直接検出を可能にする新規蛋白質タグとして機能するように操作できた。本研究では,植物におけるNanoLucによるタグ蛋白質に対するゲートウェイ適合性ベクターを開発した。また,全蛋白質抽出物の200pgの低さからNanoLuc標識MPK3を検出できるゲル内検出条件を調整した。FLAGタグとウェスタンブロッティングに基づく検出と比較して,NanoLucタグと最適化したゲル内検出は検出感度の増加を示したが,ブロッティングと免疫検出段階を省略した。また,蛋白質発現分析,共免疫沈降による蛋白質-蛋白質相互作用のプロービング,及びPhos-タグゲル電気泳動によるin vivo蛋白質リン酸化検出に対するNanoLucに基づくゲル検出法の多目的応用を示した。最後に,NanoLucを用いて,コムギ矮性ウイルスレプリコンとCRISPR/Cas9仲介遺伝子ターゲティングを用いて,その内因性遺伝子座で遺伝子を標識した。著者らのデータは,NanoLucタグとゲル内検出が高感度の標識蛋白質の迅速検出を可能にすることを示唆する。多目的NanoLucツールキットと簡便なゲル検出法は,植物機能ゲノミクスのin vitroとin vivo蛋白質分析を促進することが期待される。Copyright The Author(s), under exclusive licence to Springer Nature B.V. part of Springer Nature 2021 Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *最適化 ,  *ゲル ,  ゲル電気泳動 ,  遺伝子 ,  抗体 ,  コムギ ,  *タンパク質 ,  *検出法 ,  遺伝子発現 ,  ベクター ,  ブロッティング ,  in vitro実験 ,  遺伝子ターゲティング ,  ウェスタンブロット法
準シソーラス用語： 蛋白質発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： NanoLuc ,  ゲル内検出 ,  植物 ,  蛋白質分析 ,  ノックイン

分類 (3件)： 作物育種一般  (FC02010K) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (6件)： 植物 ,  蛋白質分析 ,  汎用 ,  最適化 ,  ゲル ,  検出法