抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】リポ多糖類(LPS)によって誘発されたRAW264.7マクロファージの免疫応答に及ぼすFractalkine(CX3CL1,FKN)の効果を研究する。方法:RAW264.7細胞を体外培養し、レンチウイルス技術を用いてFKNを過剰発現する安定細胞ビーズを構築した。細胞を8群に分けた。(1)ブランク対照群;(2)LPS群,リポ多糖類(1μg/mL,12時間);(3)ICG-001群は,Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路阻害剤ICG-001(10μmol/mL,48時間)に細胞を与えた。(4)FKN群;(5)ICG-001+LPS群、細胞をICG-001(10μmol/mL前処理36h)後、リポ多糖(1μg/mL、12h)を加えた。(6)FKN+LPS群を過剰発現し、FKN細胞を過剰発現し、リポ多糖(1μg/mL、12h)を投与する。(7)FKN+ICG-001を過剰発現し、FKN細胞を過剰発現し、ICG-001(10μmol/mL、48h)を投与した。(8)FKN+ICG-001+LPS群を過剰発現し、FKN細胞を過剰発現し、ICG-001(10μmol/mLの前処理36h)後、リポ多糖(1μg/mL、12h)を加えた。CCK-8細胞増殖アッセイを用いて,マクロファージにおけるICG-001の安全濃度を測定した。酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)を用いてマクロファージの上澄液におけるM1型分極因子TNF-αとIL-6の含有量を測定した。マクロファージにおけるFKN,Wnt/β-カテニン経路の鍵となる因子,Wnt-4とβ-カテニン,M1型分極因子,iNOS,TNF-αとIL-6の蛋白質発現を,ウエスタンブロット法(WB)で測定した。免疫蛍光法(IF)を用いてマクロファージにおけるM1型分極因子IL-6蛋白の定位を測定した。【結果】FKNを過剰発現したRAW264.7細胞におけるFKNの蛋白質レベルは,ブランク対照群より有意に高かった(P<0.01)。CCK-8実験はICG-001がRAW264.7細胞48時間に作用したIC50が10μmol/mLであることを示した。LPS群と比較して,TNF-αとIL-6の分泌量,TNF-α,IL-6とiNOSは,ICG-001+LPS群で増加した(P<0.05)。Wnt-4とβ-カテニンは,有意に減少した(P<0.01)。TNF-αとIL-6の分泌とTNF-α,IL-6とiNOSの蛋白質発現は,EX-FKN+LPS群で有意に減少した(P<0.01)。Wnt-4とβ-カテニンは,有意に増加した(P<0.01)。LPS群と比較して、ICG-001+LPS群のIL-6の細胞質における定位は増強され、EX-FKN+LPS群のIL-6の細胞質における定位は抑制された。【結論】FKNの過剰発現は,Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路の活性化を通して,マクロファージのM1型分極を阻害する。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】
