抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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【目的】乳癌の転移に及ぼすmiR-4443の影響を研究する。【方法】乳癌患者3例におけるmiR-4443の発現を,ハイスループット配列決定法により測定した。TCGAデータベースを用いて、乳癌組織及び正常乳腺組織におけるmiR-4443の発現レベルを検証した。MCF-7細胞(低浸潤性乳癌細胞)とMDA-MB-231細胞(高浸潤性乳癌細胞)を研究対象とし、RT-qPCRを用いてmiR-4443の2種類の細胞株における発現レベルを検証した。miR-4443mics(miR-4443模倣体),mics-NC(miR-4443模倣物の対照物)またはmiR-4443inhibitors(miR-4443阻害物質)を電気トランスフェクション法を介して試験した。inhibitors-NC(miR-4443サプレッサーの対照物)を異なる細胞株にトランスフェクトし,RT-qPCRを用いてmiR-4443のトランスフェクション前後の発現レベルを測定した。フローサイトメトリー(FCM)を用いて,乳癌のアポトーシスに及ぼすmiR-4443発現量の影響を分析し,そして,miR-4443発現レベルの変化による乳癌細胞の遊走と浸潤能への影響を,スクラッチ試験とTranswell浸潤実験によって検出した。バイオインフォマティクスソフトウェアを用いてmiR-4443の潜在的な標的遺伝子を予測し、さらにダブルルシフェラーゼレポーター遺伝子系統を用いて検証した。RT-qPCRとWesternblotを用いて、異なる細胞株におけるPEBP1(組換えヒトホスファチジルエタノールアミン結合蛋白質1)のmRNAとタンパクレベルにおける発現をそれぞれ測定した。【結果】乳癌組織におけるmiR-4443発現は,癌組織(P<0.01)におけるそれよりかなり高かった。TCGAデータ分析では、正常な乳腺組織と比べ、miR-4443の乳癌組織における発現が上昇する(P<0.01)。RT-qPCRは,MDA-MB-231細胞におけるmiR-4443の発現がMCF-7細胞と比較して増加したことを示した(P<0.01)。【結果】miR-4443のmiR-4443発現は,miR-4443micsのトランスフェクション後に上方制御された(P<0.01)。miR-4443inhibitorsを形質移入したMDA-MB-231細胞は,下方制御された(P<0.01)。miR-4443micsに形質移入したMCF-7細胞のアポトーシス率は,陰性対照およびブランク対照群とは有意差がなかった(P>0.05)。また,miR-4443inhibitorsに形質移入したMDA-MB-231細胞のアポトーシス率は,陰性対照とブランク対照群(P>0.05)とは有意差がなかった。スクラッチ試験およびTranswell浸潤実験は,miR-4443inhibitorsに形質移入したMDA-MB-231細胞の移動および浸潤能力が弱められた(P<0.01)。逆に、miR-4443micsをトランスフェクションしたMCF-7細胞の遊走及び浸潤能力は増強した(P<0.01)。バイオインフォマティクスソフトウェアによる予測は,PEBP1がmiR-4443の潜在的な標的遺伝子であり,転移と最も関連があることを示している。二重ルシフェラーゼレポーター遺伝子実験を実施して,PEBP1がmiR-4443の標的遺伝子であることを示した(P<0.01)。RT-qPCRとWesternblotにより、MDA-MB-231細胞中のPEBP1のmRNAと蛋白中の水は平均MCF-7細胞より低い(P<0.01)。miR-4443micsに形質移入したMCF-7細胞において,PEBP1mRNAおよび蛋白質レベルは,対照(P<0.01)のそれより低かった。miR-4443inhibitorsに形質移入したMDA-MB-231細胞において,PEBP1mRNAと蛋白質レベルは,対照(P<0.01)より高かった。【結語】miR-4443は,PEBP1発現の抑制を通して,乳癌細胞の遊走と浸潤能力を促進し,miR-4443発現の抑制は,将来の潜在的治療法である可能性がある。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】