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J-GLOBAL ID：202102242744065087   整理番号：21A2349878

ヒト脂肪組織/前駆細胞におけるCRISPR/Cas9仲介遺伝子ノックアウト【JST・京大機械翻訳】

CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in human adipose stem/progenitor cells

著者 (22件)： Mandl Markus (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Mandl Markus (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria) ,  Ritthammer Heike (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Ejaz Asim (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Ejaz Asim (Adipose Stem Cell Center, Department of Plastic Surgery, University of Pittsburgh, PA, USA) ,  Wagner Sonja A. (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Hatzmann Florian M. (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Hatzmann Florian M. (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria) ,  Baumgarten Saphira (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Viertler Hans P. (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Viertler Hans P. (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria) ,  Zwierzina Marit E. (Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Innsbruck Medical University, Innsbruck, Austria) ,  Mattesich Monika (Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Innsbruck Medical University, Innsbruck, Austria) ,  Schiller Valerie (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Schiller Valerie (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria) ,  Rauchenwald Tina (Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Innsbruck Medical University, Innsbruck, Austria) ,  Ploner Christian (Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Innsbruck Medical University, Innsbruck, Austria) ,  Waldegger Petra (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Waldegger Petra (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria) ,  Pierer Gerhard (Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Innsbruck Medical University, Innsbruck, Austria) ,  Zwerschke Werner (Division of Cell Metabolism and Differentiation Research, Research Institute for Biomedical Aging Research, University of Innsbruck, Austria) ,  Zwerschke Werner (Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI), University of Innsbruck, Austria)
資料名： Adipocyte  (Adipocyte)
巻： 9  号： 1  ページ： 626-635  発行年： 2020年 
JST資料番号： W5753A  ISSN： 2162-3945  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： CRISPR/Cas9系は遺伝子ノックアウト(KO)により特異的機能喪失表現型を生成する強力なツールである。しかし,このアプローチは初代ヒト細胞において困難である。この技術レポートにおいて,著者らはヒト脂肪幹/前駆細胞(ASC)のゲノムにおける機能的KOを達成するための信頼できるプロトコルを提示する。CRISPR/Cas9仲介KOのモデル標的遺伝子としてSprouty1(SPRY1)を用いて,CRISPR/Cas9標的配列の選択と機能的遺伝子KOを得るための適切なレンチウイルスベクターの採用を含む手順を特化した。SPRY1遺伝子の変異に対するCRISPR/Cas9の効率を,PCRに基づく突然変異検出アッセイと配列分析により決定した。mRNAと蛋白質レベルに及ぼす影響をRT-qPCRとウェスタンブロット法によって研究した。加えて,CRISPR/Cas9仲介SPRY1 KOとshRNAによる遺伝子サイレンシングは,Sprouty1蛋白質を枯渇し,脂肪生成分化を阻害するため同様に効果的であることを示す。要約すると,ヒトASCにおける遺伝子KOを達成するための信頼できるアプローチを示し,他の初代細胞型にも応用できた。略語:ASC:Adipoogenic Stem/Progenitor Cell;Cas:CRISPR関連システム;CRISPR:クラスター化規則的空間パリンドローム反復;gDNA:ゲノムDNA;GOI:関心の遺伝子;gRNA:ガイドRNA;NHEJ:非相同末端結合;Indel:挿入/Deletion;PAM:プロトスペース隣接モチーフ;sWAT:皮下白色脂肪組織;TIDE:分解によるインデルの追跡。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： mRNA ,  *遺伝子 ,  *脂肪組織 ,  タンパク質 ,  ヒト ,  表現型 ,  分化 ,  クラスタ化 ,  略語 ,  ゲノム ,  パリンドローム ,  ウェスタンブロット法 ,  定量的PCR法
準シソーラス用語： 低分子ヘアピンRNA ,  非相同末端結合 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： 脂肪幹細胞 ,  老化 ,  CRISPR/Cas9 ,  ゲノム編集 ,  機能の損失 ,  肥満

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (7件)： ヒト ,  脂肪組織 ,  前駆細胞 ,  CRISPR ,  Cas9 ,  仲介 ,  遺伝子ノックアウト