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J-GLOBAL ID:202102256794681419   整理番号:21A0035299

Amplex red/horseradishペルオキシダーゼアッセイはNAD(P)H存在下で過酸化水素を測定するためのスーパーオキシドジスムターゼを必要とする【JST・京大機械翻訳】

The amplex red/horseradish peroxidase assay requires superoxide dismutase to measure hydrogen peroxide in the presence of NAD(P)H
著者 (4件):
資料名:
巻: 54  号: 8-9  ページ: 620-628  発行年: 2020年 
JST資料番号: E0453B  ISSN: 1071-5762  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: イギリス (GBR)  言語: 英語 (EN)
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セイヨウワサビペルオキシダーゼ(AR/HRP)によるAmplex Red(AR)酸化に基づく高感度蛍光アッセイを記述し,比較的高濃度のNADPHの存在下でミクロソーム酵素によるH_2O_2産生の速度を連続的にモニターした。NADPHとNADHはHRPと相互作用することが知られており,AR/HRPアッセイを妨害するH_2O_2を形成するために自発的に不均化するラジカルであるスーパーオキシドアニオンのかなりの量を生成する。ミクロソーム酵素はNADPHからチトクロームP450ヘム蛋白質への電子移動の結果として,その後の酸素活性化によりH_2O_2を生成する。NADPHとHRPの相互作用を介したスーパーオキシドアニオン形成は,ミクロソーム酵素によるH_2O_2生成に影響することなくスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)により阻害されることを見出した。酵素アッセイにおいてSODを用いて,ミクロソーム蛋白質(ナイーブ雌ラット由来の肝臓ミクロソームに対する2.62±0.20ピコモル/分/μg蛋白質,デキサメタゾン誘導雄ラット由来の肝臓ミクロソームに対する12.27±1.29,及びヒト肝臓ミクロソームに対する2.17±0.25ピコモル/分/μg蛋白質)を用いてH_2O_2産生の速度を一貫して検出した。この方法は,NADHまたはNADPHとHRPによるスーパーオキシドアニオン生成が酵素アッセイに干渉できるオキシダーゼによるH_2O_2生産速度の定量化にも適用可能である。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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細胞生理一般 
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