抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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目的:有効な細菌性角膜炎の体外細胞モデルを確立し、角膜間質細胞への影響を検討する。方法;【方法】SDラット角膜間質細胞を接着法で分離して,1000細胞100μl-1ウェル-1を接種して,CCK8を用いて,種々の濃度(0.4,2,10,50,250,1250mg/L)のリポ多糖類(LPS)を処理した。2,3,4,5d以内の用量効果曲線,対照群にはPBS(n=3)を用いた。用量効果曲線に従ってモデリング濃度を選定後,モデル群と対照群(n=3)をそれぞれ設定した。角膜間質細胞の形態変化を光学顕微鏡で観察した。5000細胞・100μl-1・孔-1で接種し,CCK8を用いてLPS作用6,12hの角膜間質細胞の短期活性への影響を測定した。LPS処理6,12時間後の角膜間質細胞の移動度を,ELISAによって測定し,TNF-αとIL-6分泌をELISAによって測定し,コラーゲン分泌を免疫蛍光染色によって同定し,マトリックスメタロプロテイナーゼ9(MMP9)発現をウエスタンブロット法によって検出した。【結果】対照群と比較して,10,50,250,1250mg/Lの角膜間質細胞の活性は,LPS処置の1日後に減少した(すべてP<0.05)。細胞炎症誘導の必要条件を満たすため、細胞増殖抑制効果が現れた低薬物濃度10mg/LLPSを用いて体外炎症細胞モデルを構築した。細胞を5日間培養し,対照群と比較し,モデル群の角膜間質細胞形態は紡錘から多角形に変形した。細胞移植密度の調整後、短期の体外活性検査により、対照群と比べ、モデル群の角膜間質細胞はLPS作用6hと12h後に細胞活性抑制現象が現れた[6h;0.036±0.006対0.061±0.006,12時間;0.033±0.004対0.053±0.005,P<0.05]。6hと12hでモデル群の角膜間質細胞の体外移動率は対照群[6h]より明らかに低かった。(6.77±3.22)Pixel/h比(16.52±1.18)Pixel/h,12時間;(8.41±1.45)Pixel/h比(17.09±0.75)Pixel/h,P<0.05]。LPSの48時間処理後,対照群と比べて,モデル群の角膜間質細胞の炎症因子分泌レベルは上昇した[TNF-α]。(446.71±20.59)pg/ml(289.27±26.44)pg/ml,IL-6;(146.26±17.34)pg/ml対(65.94±10.11)pg/ml,P<0.05];MMP9発現量は,[0.884±0.052対0.385±0.036,P<0.05]増加した。I、VI型コラーゲンの含有量は低下[I型;(0.46±0.15)×105Pixel2(1.21±0.53)×105Pixel2,VI型;(2.63±2.07)×106Pixel2(7.08±1.52)×106Pixel2,P<0.05],III型コラーゲン含量[(3.69±0.73)×105Pixel2対1]。12±0.40)×105Pixel2,P<0.05]。結論:LPS誘導角膜間質細胞は角膜炎における細胞炎症反応及び変化をシミュレーションすることができ、細菌性角膜炎の機序と治療方法を研究する有効な体外細胞モデルを提供する。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】