抄録/ポイント：
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ABSTRACTWhile海洋微生物は自然環境で頻繁に研究され,単離株は自然系からの直接観察で拡大するために制御実験で使用できる貴重な資源である。ここでは,接種物としてグリセロールで凍結保存した海水の使用を試験することにより,SAR11海洋細菌の培養収集を増強する方法を検討した。熱帯太平洋から採取した生海水試料を用いて,サブサンプルを海水成長培地で希釈し,それぞれ5細胞を含む5762ml希釈培養を作成し,高処理培養(HTC)実験のためにインキュベートし,一方,他の部分は10%グリセロールで凍結保存した。10か月後に,凍結保存したアリコートを解凍し,それぞれ5細胞を含む4802mlの培養および105細胞を含む470の培養の2回目の培養実験を作成するために使用した。生海水培養実験は,54の単一培養と29の混合培養の成功した分離をもたらし,一方,凍結保存海水は59の単培養と29の混合培養をもたらした。培養は,生海水接種物からの11のユニークな16S rRNA遺伝子アンプリコン配列変異体(ASV)と,凍結保存海水から13のユニークなASVsにわたる74のSAR11分離株を含む51のSAR11分離株を含んだ。2つのHTC実験からのSAR11分離株の大多数(92%)はSAR11サブクレードIaのメンバーであったが,サブクレードIIIaとVaは凍結保存海水からも回収され,サブクレードIbは両方から回収された。初期海水環境試料で見出された4つの最も豊富なSAR11サブクレードIa ASVを両方のアプローチによって分離した。IMPORTANCEのハイスループット希釈培養は,海洋細菌の高度に豊富なSAR11系統を含む培養にいくつかの困難な浮遊性微生物をもたらすための成功したアプローチであることを証明した。グリセロールのような凍結防止剤の存在下でそれらを凍結することによる細菌分離株の長期保存は,長期期間(すなわち年)にわたって生存細胞を貯蔵する効果的な方法であることが示されてきたが,我々の知る限りでは,ハイスループット培養実験のための接種物として後の使用のための生海水保存における有効性について以前に試験されていなかった。SAR11と他の豊富な海洋細菌は,収集直後に同じ海水と同程度の培養性率でほぼ10か月間凍結保存された海水から分離できることを見出した。著者らの知見(i)は,即時分離実験が非現実的である場合,(ii)微生物群構造のような分析に基づく特異的試料からの標的分離実験を可能にする,そして(iii)長期間にわたる長期間にわたって利用可能なソース接種物から利益を得る広範囲の他の条件にわたる培養実験を可能にする,ハイスループット培養実験の可能性を拡張する。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
