特許
J-GLOBAL ID:202103000983189866
新規RNAプログラム可能エンドヌクレアーゼ系、ならびにゲノム編集および他の適用におけるその使用
発明者:
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出願人/特許権者:
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代理人 (5件):
山本 秀策
, 森下 夏樹
, 飯田 貴敏
, 石川 大輔
, 山本 健策
公報種別:公表公報
出願番号(国際出願番号):特願2020-532048
公開番号(公開出願番号):特表2021-506251
出願日: 2018年12月14日
公開日(公表日): 2021年02月22日
要約:
本発明の態様は、とりわけ、Staphylococcus lugdunensis由来のSluCas9ヌクレアーゼもしくはそのバリアントおよび1つもしくは複数のガイドRNA(gRNA)をコードする1つもしくは複数の異種ベクター、またはSluCas9ヌクレアーゼもしくはそのバリアントおよび1つもしくは複数のgRNAを含む、細胞におけるDNAを標的化、編集または操作するための新規の系に関する。本発明は、公知CRISPR-Casエンドヌクレアーゼとは異なるかつ有利な特徴および機能性を有する、Staphylococcus lugdunensis由来のCRISPR-Cas9(SluCas9)ファミリーの新規CRISPR-Casエンドヌクレアーゼ、およびそのバリアントを提供し、よって、以前には存在していなかったゲノム編集のさらなる機会を提供する。
請求項(抜粋):
(a)配列番号2に記載のSluCas9ポリペプチド、または以下のそのバリアント:
(I)配列番号2に記載の配列の全長または配列番号2の789位〜1053位に対して少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも99%または100%のアミノ酸同一性のバリアント;
(II)無細胞反応物における、または原核細胞および真核細胞環境、例えば、生存可能な植物または動物における、前記SluCas9ポリペプチドを含むSluCas9 CRISPR系の活性を得るための、例えば、核局在化シグナル等の追加的な構成要素を含有する、(I)に記載のバリアント、例えば、配列番号3に記載のポリヌクレオチド配列;
(III)SluCas9ならびに(I)および(II)に記載の前記バリアントをコードする対応するポリヌクレオチド配列のコドン最適化されたバリアント、例えば、配列番号3の61〜3225位のポリヌクレオチド配列ならびに配列番号44および45に記載のポリヌクレオチド配列;または
(IV)(I)〜(III)のいずれかに記載のバリアントであって、
i.1つまたは複数の改変または変異がない対応するSluCas9(例えば、配列番号2のアミノ酸配列を含むSluCas9)と比較して有意に低下したヌクレアーゼ活性、または検出不能なヌクレアーゼ活性を有するSluCas9をもたらす、1つまたは複数の改変または変異、例えば、1つまたは複数のアミノ酸置換(例えば、アラニン置換)であって、置換が、配列番号2に対して、10位(例えば、D10A)、559位(例えば、H559A)および/または582位(例えば、N582A)にある、改変または変異;ならびに/あるいは
ii.核酸塩基編集活性またはデアミナーゼ活性を有する、CまたはN末端に結合した、例えばリンカーペプチド配列を介して結合した、ポリペプチド
をさらに含む、バリアント;と
(b)1つもしくは複数の単一異種ガイドRNA(sgRNA)または前記1つもしくは複数のsgRNAをコードする核酸(例えば、DNA)であって、各sgRNAが、
(I)RNAで構成され、ポリヌクレオチド座位における標的配列にハイブリダイズすることができる、DNA標的化セグメント、
(II)RNAで構成されたtracrメイト配列、および
(III)RNAで構成されたtracr RNA配列
を含み、前記tracrメイト配列が、前記tracr配列にハイブリダイズすることができ、(I)、(II)および(III)が、5’から3’への方向で配置されている、sgRNAまたは核酸と
を含む、組成物。
IPC (10件):
C12N 15/09
, C12N 15/55
, C12N 9/22
, C12N 15/11
, C12N 5/10
, C12N 1/15
, C12N 1/19
, C12N 1/21
, C12N 9/14
, C12N 15/62
FI (10件):
C12N15/09 110
, C12N15/55
, C12N9/22
, C12N15/11 Z
, C12N5/10
, C12N1/15
, C12N1/19
, C12N1/21
, C12N9/14
, C12N15/62 Z
Fターム (20件):
4B050CC04
, 4B050CC05
, 4B050DD02
, 4B050HH01
, 4B050HH02
, 4B050LL01
, 4B050LL03
, 4B065AA01X
, 4B065AA01Y
, 4B065AA57X
, 4B065AA72X
, 4B065AA87X
, 4B065AB01
, 4B065AC14
, 4B065BA02
, 4B065BD35
, 4B065BD44
, 4B065CA31
, 4B065CA44
, 4B065CA46
引用特許:
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