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J-GLOBAL ID：202202227715133957   整理番号：22A0776170

局所的トランスクリプトームおよびプロテオームの細胞下分析および空間マッピングのための分画および蛍光選別による哺乳類CNSからのニューロンサブタイプ特異的成長円錐およびソマ精製【JST・京大機械翻訳】

Neuronal subtype-specific growth cone and soma purification from mammalian CNS via fractionation and fluorescent sorting for subcellular analyses and spatial mapping of local transcriptomes and proteomes

著者 (10件)： Engmann Anne K. (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Hatch John J. (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Nanda Prakruti (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Veeraraghavan Priya (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Ozkan Abdulkadir (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Poulopoulos Alexandros (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Poulopoulos Alexandros (Department of Pharmacology, University of Maryland School of Medicine, Baltimore, MD, USA) ,  Murphy Alexander J. (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA) ,  Murphy Alexander J. (Takeda Pharmaceutical Company Limited, Cambridge, MA, USA) ,  Macklis Jeffrey D. (Department of Stem Cell and Regenerative Biology and Center for Brain Science, Harvard University, Cambridge, MA, USA)
資料名： Nature Protocols  (Nature Protocols)
巻： 17  号： 2  ページ： 222-251  発行年： 2022年 
JST資料番号： W4781A  ISSN： 1754-2189  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 文献レビュー  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： ニューロン発生の間,投射ニューロンの成長円錐(GC)は,複雑な細胞外環境をナビゲーションし,遠隔標的に達し,それによって異常に複雑な回路を生成する。軸索投射の先端に位置するこれらの動的構造は,高度に特異的で機能的な回路を構成するために,ニューロンサブタイプおよび段階特異的様式で,基質結合および拡散性誘導キューに応答する。過去10年間のin vitro研究は,GCsにおける特異的分子機械の細胞内局在が,回路 航の間に起こる正確なナビゲーション制御の基礎となることを示している。著者らの研究室は最近,in vivoでげっ歯類中枢神経系(CNS)から直接サブタイプおよびステージ特異的GC分子機械の,高深度,定量的プロテオミクスおよびトランスクリプトーム研究を可能にする統合実験および分析アプローチを開発した。これらのアプローチを用いることにより,GCsと対物型ソマタの純粋集団を,蛍光標識できるCNSの任意の神経サブタイプから分離できる。GCは流体せん断力を用いて親軸索から解離され,バルクGC画分は浮力超遠心によって分離される。サブタイプ特異的GC及びソマタは最近開発した蛍光小粒子ソーティングにより精製され,ニューロンのFACSを確立し,小RNAを含む蛋白質及びRNAの下流分析に適している。サブタイプ特異的GCsと親の体節の単離は,分子含有量のその後の抽出のために,ΔΨ3h,プラスソーティング時間,およびΔΨ1-2hを採った。RNAライブラリー調製と配列決定は,関与するコア施設のターンアラウンド時間に依存して数週間に数日かかる。著者らは,液体せん断力,超遠心,蛍光小粒子ソーティングおよびFACSによって蛍光標識できるCNSの任意のニューロンサブタイプから,成長円錐および対体節の分離を可能にするプロトコルを提示する。Copyright The Author(s), under exclusive licence to Springer Nature Limited 2022 Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *蛍光 ,  *ニューロン ,  微粒子 ,  RNA【核酸】 ,  基質 ,  タンパク質 ,  ソーティング ,  蛍光標識 ,  齧歯類 ,  超遠心 ,  *成長円錐 ,  *トランスクリプトーム ,  *プロテオーム
準シソーラス用語： 低分子RNA ,  細胞内局在 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 発生と分化  (EJ16020W) ,  中枢神経系  (EJ12030F)

タイトルに関連する用語 (13件)： トランスクリプトーム ,  プロテオーム ,  細胞 ,  分析 ,  空間マッピング ,  分画 ,  蛍光 ,  選別 ,  哺乳類 ,  ニューロン ,  サブタイプ ,  成長円錐 ,  精製