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J-GLOBAL ID：202202248319362026   整理番号：22A1100133

不溶性封入体として発現したAphanizomenon flos-aquaeからの低温活性組換エステラーゼAaSGNH1の精製と再折畳みプロトコル【JST・京大機械翻訳】

Purification and refolding protocol for cold-active recombinant esterase AaSGNH1 from Aphanizomenon flos-aquae expressed as insoluble inclusion bodies

著者 (3件)： Knepp Zachary J. (Department of Chemistry, Lock Haven University, Lock Haven, PA, USA) ,  Ghaner Ashlea (Department of Chemistry, Lock Haven University, Lock Haven, PA, USA) ,  Root Kyle T. (Department of Chemistry, Lock Haven University, Lock Haven, PA, USA)
資料名： Preparative Biochemistry & Biotechnology  (Preparative Biochemistry & Biotechnology)
巻： 52  号： 4  ページ： 394-403  発行年： 2022年 
JST資料番号： C0240C  ISSN： 1082-6068  CODEN： PBBIF4  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 微生物エステラーゼは,エステル結合開裂を必要とする多数の生合成およびバイオテクノロジー用途のための非常に望ましいツールである。一度同定されると,微生物エステラーゼは大腸菌で組換的に生産され,収率と精製の容易さを促進する。本研究では,シアノバクテリアAphanizomenon flos-aquae由来のポリヒスチジン標識SGNHエステラーゼ遺伝子(AaSGNH1)を過剰発現プラスミドにクローン化し,BL21(DE3)細胞で発現させた。組換えエステラーゼ酵素は不活性封入体として産生され,それは8M尿素に不溶性であったが,界面活性剤Empigen BBTMによって容易に可溶化された。明らかに,活性酵素の調達は,カラムクロマトグラフィーと透析段階の間,洗剤の制御された除去を必要とした。異なる鎖長(C2,C8,C16)のp-ニトロフェノールエステルの開裂を触媒する能力に関して,再折畳みエステラーゼを特性化した。さらに,温度およびpH最適を決定し,酵素が低温(5~15°C)およびアルカリ性条件(pH8~10)下で最も活性であることが分かった。AaSGNH1の速度論的特性は,他のSGNHエステラーゼと著しく似ており,その結果,蛋白質が効果的に再折畳みされることを検証した。全体として,本研究は封入体として発現させた時,低温活性組換エステラーゼ酵素を単離するための簡単な戦略を提供した。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *低温 ,  界面活性剤 ,  大腸菌 ,  可溶化 ,  生合成 ,  エステル ,  遺伝子 ,  *エステル結合ヒドロラーゼ ,  タンパク質 ,  *封入体 ,  藍藻類 ,  *折畳み ,  開裂反応 ,  プラスミド ,  遺伝子発現
準シソーラス用語： 過剰発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： エステラーゼ ,  封入体 ,  好冷性酵素 ,  エステラーゼ再折畳み ,  酵素特性化

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  微生物の生化学  (EG03020N)

タイトルに関連する用語 (11件)： 不溶性 ,  封入体 ,  発現 ,  Aphanizomenon ,  低温 ,  活性 ,  組換 ,  エステラーゼ ,  精製 ,  折畳み ,  プロトコル