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J-GLOBAL ID:202202248557800870   整理番号:22A0435723

LbCas12a変異体システムを用いた園芸作物からの検疫病原菌のオンサイト検出のための高感度可視法【JST・京大機械翻訳】

A sensitive visual method for onsite detection of quarantine pathogenic bacteria from horticultural crops using an LbCas12a variant system
著者 (15件):
資料名:
巻: 426  ページ: Null  発行年: 2022年 
JST資料番号: B0362A  ISSN: 0304-3894  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: オランダ (NLD)  言語: 英語 (EN)
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検疫病原体の存在のための種子と小植物のプレ植栽試験は重要な植物衛生測定である。CRISPR媒介分子診断法は病原体検出のために開発されているが,多くの課題が残っている。ここでは,野生型より,よりロバストなtrans-開裂活性とより広いPAM配列(TNTN)の優先性を持つ遺伝子操作したCrispr/LbCas12a変異体(LbCas12a-5M)をプロファイリングした。細菌植物病原体の特異的配列をスクリーニングする手順を開発し,設計した種特異的crRNAは他の細菌種と交差反応を示さなかった。細菌DNAの簡単な抽出と組み合わせて,LbCas12a-5Mベースの視覚検出技術を確立し,検疫病原体Erwinia amylovoraおよびAcidovorax citrulliの検出に対して,検出限界が40CFU/反応まで,およびqPCRアッセイと一致する感度で最適化した。このプロトコルは,qPCRよりも速く,より簡単であり,試料調製から40分またはそれ以下を必要とした。さらに,スイカの種子上のA.citrulliの迅速で正確な診断に使用できることを示し,qPCRアッセイの結果と100%の一致を示した。開発した方法は病原体の検出を単純化し,検疫介入に対する費用対効果の高い対策を提供する。Copyright 2022 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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