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J-GLOBAL ID：202202256077440669   整理番号：22A1179037

相同組換え戦略を用いたBabesia duncaniのための一過性で安定なトランスフェクション系の確立【JST・京大機械翻訳】

Establishment of a Transient and Stable Transfection System for Babesia duncani Using a Homologous Recombination Strategy

著者 (17件)： Wang Sen (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Wang Sen (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Li Dongfang (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Li Dongfang (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Chen Fangwei (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Chen Fangwei (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Jiang Weijun (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Jiang Weijun (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Luo Wanxin (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Luo Wanxin (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Zhu Guan (Key Laboratory of Zoonosis Research of the Ministry of Education, the Institute of Zoonosis, and the College of Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun, China) ,  Zhao Junlong (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Zhao Junlong (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  Zhao Junlong (Key Laboratory of Animal Epidemical Disease and Infectious Zoonoses, Ministry of Agriculture, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  He Lan (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  He Lan (Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Hubei Province, College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China) ,  He Lan (Key Laboratory of Animal Epidemical Disease and Infectious Zoonoses, Ministry of Agriculture, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China)
資料名： Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (Web)  (Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (Web))
巻： 12  ページ： 844498  発行年： 2022年 
JST資料番号： U7063A  ISSN： 2235-2988  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： スイス (CHE)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 遺伝子改変は,病原体の生物学と病因を解離するための貴重な分子ツールを提供する。しかし,北アメリカで広く普及しているヒトバベリア症の原因となる病原体であるBabesia duncaniの遺伝的改変についての報告はできず,原生動物病原体の生物学を研究し理解するための戦略を改善する遺伝的操作法の開発の必要性を示唆している。遺伝子改変法の確立は,プロモーター,選択可能なマーカー,およびレポーター遺伝子を必要とする。ここでは,二重コピー遺伝子伸長因子-1α(ef-1α)とそのプロモーターを,通常のPCRにより増幅し,配列決定により確認した。ef-1αBプロモーターとレポーター遺伝子mCherryを用いて一過性トランスフェクション系を確立し,相同組換えにより安定なトランスフェクションを達成し,選択マーカーhDHFR-eGFPを寄生虫ゲノムに統合した。この遺伝子改変法の可能性をチオレドキシンペルオキシダーゼ-1(TPX-1)遺伝子ノックアウトにより試験し,5nM WR99210の薬物圧下で,寄生虫の96.3%を,7日後のフローサイトメトリーにより緑色蛍光蛋白質(eGFP)を発現することが観察された。さらに,TPX-1ノックアウト寄生虫のクローン線を,制限希釈法によって首尾よく得た。本研究はB.duncaniのトランスフェクション法を提供し,B.duncaniの遺伝子機能研究およびワクチン開発を促進する可能性がある。Copyright 2022 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 原生動物 ,  遺伝 ,  遺伝子 ,  寄生虫 ,  プロモーター領域 ,  病原体 ,  クローン ,  フローサイトメトリー ,  *トランスフェクション ,  *相同組換 ,  レポーター遺伝子 ,  病因 ,  緑色蛍光タンパク質
準シソーラス用語： ワクチン開発 ,  遺伝子改変 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Babesia duncani ,  安定なトランスフェクション ,  遺伝子操作 ,  相同組換え ,  TPX-1

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

引用文献 (39件)：

• Abraham A., Brasov I., Thekkiniath J., Kilian N., Lawres L., Gao R., et al. (2018). Establishment of a Continuous In Vitro Culture of Babesia Duncani in Human Erythrocytes Reveals Unusually High Tolerance to Recommended Therapies. J. Biol. Chem. 293, 19974-19981. doi: doi: 10.1074/jbc.AC118.005771
• Adamson R., Lyons K., Sharrard M., Kinnaird J., Swan D., Graham S., et al. (2001). Transient Transfection of Theileria Annulata. Mol. Biochem. Parasitol. 114, 53-61. doi: doi: 10.1016/S0166-6851(01)00238-9
• Alzan H. F., Cooke B. M., Suarez C. E. (2019). Transgenic Babesia Bovis Lacking 6-Cys Sexual-Stage Genes as the Foundation for Non-Transmissible Live Vaccines Against Bovine Babesiosis. Ticks Tick-Borne Dis. 10, 722-728. doi: doi: 10.1016/j.ttbdis.2019.01.006
• Asada M., Tanaka M., Goto Y., Yokoyama N., Inoue N., Kawazu S. (2012). Stable Expression of Green Fluorescent Protein and Targeted Disruption of Thioredoxin Peroxidase-1 Gene in Babesia Bovis With the WR99210/dhfr Selection System. Mol. Biochem. Parasitol. 181, 162-170. doi: doi: 10.1016/j.molbiopara.2011.11.001
• Asada M., Yahata K., Hakimi H., Yokoyama N., Igarashi I., Kaneko O., et al. (2015). Transfection of Babesia Bovis by Double Selection With WR99210 and Blasticidin-S and Its Application for Functional Analysis of Thioredoxin Peroxidase-1. PloS One 10, e0125993. doi: doi: 10.1371/journal.pone.0125993

タイトルに関連する用語 (4件)： 相同組換え ,  戦略 ,  Babesia ,  安定なトランスフェクション