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J-GLOBAL ID：202202256187122394   整理番号：22A0976507

T型カルシウムチャンネル調節因子を同定するための膜係留遺伝的カルシウムセンサーを利用する新規蛍光ベースハイスループットFLIPRアッセイ【JST・京大機械翻訳】

Novel Fluorescence-Based High-Throughput FLIPR Assay Utilizing Membrane-Tethered Genetic Calcium Sensors to Identify T-Type Calcium Channel Modulators

著者 (12件)： Zhang Yan-Ling (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Moran Sean P. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Allen Andrew (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Baez-Nieto David (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Xu Qihong (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Wang Lei A. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Martenis William E. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Sacher Joshua R. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Gale Jennifer P. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Weiewer Michel (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Wagner Florence F. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States) ,  Pan Jen Q. (Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts, United States)
資料名： ACS Pharmacology & Translational Science  (ACS Pharmacology & Translational Science)
巻： 5  号： 3  ページ： 156-168  発行年： 2022年 
JST資料番号： W5671A  ISSN： 2575-9108  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： T型電位依存性Ca2+チャンネルは多くのヒト疾患に関与しており,潜在的臨床使用のための高選択的で強力なT型Ca2+チャンネルモジュレータの開発への関心が高まっている。しかし,T型Ca2+チャンネルのユニークな生物物理学的特性は,モジュレーター,特にポテンシレータを同定するためのハイスループットスクリーニング(HTS)アッセイの開発に役立たない。説明するために,T型Ca2+チャンネルは,細胞スクリーニングアッセイで通常用いられる細胞株の典型的な静止膜電位である-25mVでCa2+流入を許すために,主に不活性化され,開けられない。この課題に取り組むため,K_ir2.3チャンネルを発現する細胞系を開発し,膜電位を-70mVに過分極させ,T型チャンネルを細胞外KClの存在下で膜脱分極により活性化できる静止状態に戻すようにした。さらに,HTSアッセイを単純化し,試薬コストを削減するために,著者らは,非結合GCaMP6sまたは合成Ca2+センサFluo-4AMと比較して,バックグラウンドに対して優れたシグナルを示す膜結合遺伝子カルシウムセンサ,GCaMP6s-CAAXを安定的に発現させた。ここでは,T型Ca2+チャンネルの活性化剤および阻害剤の両方を同定することができる,ハイスループット蛍光イメージングプレートリーダー(Molecular Detwor,Sunnyvale,CA)フォーマットを用いた,新しいGCaMP6s-CAAXに基づくカルシウムアッセイを述べた。最後に,この新規蛍光に基づくアッセイの有用性を実証し,2つの異なるG蛋白質共役受容体の活性を評価し,薬物発見における細胞アッセイの開発に関連する広範囲の応用へのGCaMP6s-CAAXの使用を拡大した。Copyright 2022 American Chemical Society All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *蛍光 ,  簡素化 ,  *カルシウム ,  変調器 ,  膜電位 ,  *遺伝 ,  遺伝子 ,  細胞 ,  脱分極 ,  蛍光測定 ,  *係留 ,  培養細胞 ,  過分極
準シソーラス用語： 細胞株 ,  活性化剤 ,  蛍光イメージング ,  *ハイスループット , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： T型カルシウムチャネル ,  GCaMP6 ,  高スループット ,  電気生理学 ,  蛍光イメージングプレート読取装置 ,  薬物発見

分類 (2件)： 細胞生理一般  (EF02010S) ,  細胞膜の輸送  (EF04020R)

タイトルに関連する用語 (10件)： T型カルシウムチャンネル ,  調節因子 ,  同定 ,  係留 ,  遺伝 ,  カルシウム ,  センサー ,  蛍光 ,  ハイスループット ,  アッセイ