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J-GLOBAL ID:202202277485015753   整理番号:22A1170538

K+チャンネルの構造的および機能的研究のための合成抗体フラグメントの工学【JST・京大機械翻訳】

Engineering of a synthetic antibody fragment for structural and functional studies of K+ channels
著者 (8件):
資料名:
巻: 154  号:ページ: Null  発行年: 2022年 
JST資料番号: C0581A  ISSN: 0022-1295  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: アメリカ合衆国 (USA)  言語: 英語 (EN)
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工学的抗体断片(Fabs)は,特に膜蛋白質の構造決定を助けるために,構造生物学研究に大きな影響を与える。それにもかかわらず,従来のモノクローナル技術によって生成されたFabは,ルーチンの生産と貯蔵の課題に悩まされる。KcsA K+チャンネルの”turretループ”に結合する抗体の既知IgGパラトープから始めて,大腸菌で組換発現され,一段階アフィニティークロマトグラフィーで精製できる高度に安定なHerceptin Fab足場に基づく合成Fab(sFab)を操作した。この合成Fabを結晶化シャペロンとして用いてKcsAチャンネルの結晶を得た。さらに,ループグラフト戦略の支援において,ターレットループが無関係な電圧ゲートKv1.2-Kv2.1チャネルにグラフトされ,工学sFabと強く結合できることを示した。巨視的電気生理学記録は,sFabがキメラ電圧ゲートチャンネルの活性化とコンダクタンスに影響することを示した。これらの結果は,組換えフォーマットを用いた抗体の直接工学が,構造生物学ツールおよび機能的プローブとしてFabsの迅速かつスケーラブルな生産を容易にすることができることを示唆する。このアプローチの影響は,他のK+チャンネルの無数に対するturretループのポテンシャルポータビリティに基づいて著しく拡張される。Please refer to the version of record for the copyright holder. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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分類 (1件):
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抗原・抗体・補体の生産と応用 
引用文献 (40件):
  • Bailey. Applications for an engineered protein-G variant with a pH controllable affinity to antibody fragments. J. Immunol. Methods. 2014, 415, 24. doi:10.1016/j.jim.2014.10.003
  • Bloch. Development of a universal nanobody-binding Fab module for fiducial-assisted cryo-EM studies of membrane proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2021, 118, doi:10.1073/pnas.2115435118
  • Borowska. A YidC-like protein in the archaeal plasma membrane. Structure. 2015, 23, 1715. doi:10.1016/j.str.2015.06.025
  • Bradbury. Antibodies from phage antibody libraries. J. Immunol. Methods. 2004, 290, 2910. doi:10.1016/j.jim.2004.04.007
  • Cordero-Morales. Molecular determinants of gating at the potassium-channel selectivity filter. Nat. Struct. Mol. Biol. 2006, 13, 311. doi:10.1038/nsmb1069
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