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J-GLOBAL ID：202202281583166462   整理番号：22A1139936

マウスNR1D1遺伝子過剰発現ベクターの構築とそのバイオインフォマティクス分析【JST・京大機械翻訳】

Construction of mouse NR1D1 gene overexpression vector and its bioinformatics analysis

著者 (6件)： Dong Hao (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Jiang Haizhen (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Li Chao (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Gao Dengke (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Jin Yaping (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Chen Huatao (西北農林科技大学動物医学院臨床獣医系,陜西 楊凌 712100;西北農林科技大学 農業農村部動物生物技術重点実験室,陜西 楊凌 712100)
資料名： Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban  (Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban)
巻： 48  号： 1  ページ： 94-103  発行年： 2022年 
JST資料番号： C2934A  ISSN： 1671-587X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:マウス核受容体サブファミリーの1組のDメンバー1(NR1D1)遺伝子の過発現ベクターを構築し、マウスNR1D1タンパクの基本的な特徴を分析する。方法;マウス肝臓組織から総RNAを抽出し、逆転写後にcDNAを獲得し、PCR技術を用いて、マウスNR1D1遺伝子のコード領域断片を獲得し、相同組換えとpcDNA3.1ベクターに連結し、制限酵素同定と塩基配列決定の正しい組換えプラスミドをpcDNA3と命名した。1-NR1D1。組換えプラスミドpcDNA3.1-NR1D1とpcDNA3.1-NR1D1をHEK293T細胞にトランスフェクションし,それぞれ対照群とpcDNA3.1-NR1D1トランスフェクション群,48時間後に総RNAと総蛋白質を抽出した。リアルタイム蛍光定量的PCR(RT-qPCR)とウェスタンブロット法を用いて,NR1D1mRNAと蛋白質発現を検出した。DNAStarとMEGA7ソフトウェアを用いて、マウスと他の種のNR1D1遺伝子コード領域配列(CDS)に対して類似性分析を行い、系統樹を構築した。ExPASy,ProtScale,SingalP5.0,TMHMM-2.0,PhosphoSitePlus?NR1D1蛋白質のアミノ酸組成,親/疎水性,膜貫通領域,シグナルペプチド,二次構造,および三次構造を,SOPMAとSWISS-MODELのオンラインツールで分析した。結果:制限酵素消化とシークエンシングの結果は,発現ベクターpcDNA3.1-NR1D1の構築に成功したことを示した。対照群と比べ、pcDNA3.1-NR1D1トランスフェクション群の細胞中のNR1D1mRNAとタンパク発現レベルは明らかに上昇した(P<0.01)。バイオインフォマティクス分析では,マウスNR1D1CDSは,ヒト,ラット,ハムスター,チンパンジー,ウサギ,イヌ,ブタ,ウマ,ウシ,ヒツジ,ヤギ,ネコ,およびゼブラフィッシュとそれぞれ,90.0%,94.8%,86.5%,90.0%,89.6%,88.3%および88.3%であった。89.7%,89.8%,88.8%,89.1%,89.7%,65.1%であった。系統樹分析では,マウスNR1D1遺伝子と中国ハムスターとラットの遺伝距離が最近,ゼブラフィッシュとの遺伝距離が最も遠い。マウスNR1D1タンパク質は一種の疎水性塩基性タンパク質であり、分泌タンパク質と膜貫通タンパク質ではなく、12のリン酸化部位と10のユビキチン化部位を含む。二次構造におけるランダムコイルは54.63%,α-ヘリックスは26.50%,伸長鎖は12.68%,β-ターンオーバーは6.18%であった。三次構造予測は、マウスとヒトのNR1D1タンパク質との類似度が大きく、差異が小さかった。結論:マウスNR1D1遺伝子の過剰発現ベクターpcDNA3.1-NR1D1の構築に成功し、HEK293T細胞における過剰発現効果を検証し、NR1D1遺伝子及びそのタンパクの機能を更に研究するために根拠を提供した。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 疎水性 ,  *遺伝子 ,  タンパク質 ,  ヌクレオチド配列 ,  ヒト ,  *マウス ,  ラット ,  系統樹 ,  二次構造 ,  cDNA ,  *遺伝子発現 ,  トランスフェクション ,  *ベクター ,  ウェスタンブロット法
準シソーラス用語： *バイオインフォマティクス ,  *過剰発現 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (3件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  腫ようの化学・生化学・病理学  (GE02030N)

タイトルに関連する用語 (6件)： マウス ,  遺伝子 ,  発現ベクター ,  構築 ,  バイオインフォマティクス ,  分析