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J-GLOBAL ID:202202282393578742   整理番号:22A0560017

酵素反応カスケードを用いたチロシンフェノールリアーゼ活性のハイスループットアッセイ【JST・京大機械翻訳】

High-throughput assay of tyrosine phenol-lyase activity using a cascade of enzymatic reactions
著者 (10件):
資料名:
巻: 640  ページ: Null  発行年: 2022年 
JST資料番号: H0177B  ISSN: 0003-2697  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: オランダ (NLD)  言語: 英語 (EN)
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チロシンフェノールリアーゼ(TPL)は,L-チロシンとその誘導体の工業的生合成において大きな可能性を示す。優れた触媒特性を有するTPLsを明らかにし,スクリーニングするために,TPLのための容易で信頼性のあるスクリーニングシステムの開発には,満たされていない要求がある。ここでは,カテコール2,3-ジオキシゲナーゼ(C23O)触媒反応に基づくTPL活性検出のための新規アッセイフォーマットを提示した。3,4-ジヒドロキシ-L-フェニルアラニン(L-DOPA)のTPL触媒開裂から放出されたカテコールはC23Oによってさらに酸化され,2-ヒドロキシムコン酸セミアルデヒドを形成し,375nmでの分光光度測定によって容易に検出できた。分析は,操作の容易さと直線性,感度および精度を含む分析性能の優位性の間のユニークなバランスを達成した。さらに,このアッセイは,高効率と信頼性でTPL活性のリアルタイムモニタリングを可能にした。C23Oはカテコールに対して高度に特異的であり,微生物の非天然産物であるために,このアッセイは粗細胞抽出物と酵素を精巧な精製段階なしに全細胞系の両方にアクセスでき,TPLの発見と工学を大きく促進することができた。本研究は,カテコール誘導体を消費し,または産生する他の酵素のハイスループットスクリーニングのための基本的原理を提供した。Copyright 2022 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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酵素一般 
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