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J-GLOBAL ID：202202283559828273   整理番号：22A1175085

RNA-蛋白質相互作用の順方向および逆遺伝子解析のための細菌3ハイブリッドアッセイ【JST・京大機械翻訳】

A bacterial three-hybrid assay for forward and reverse genetic analysis of RNA-protein interactions

著者 (6件)： Stockert Oliver M. (Program in Biochemistry, Mount Holyoke College, South Hadley, MA, USA) ,  Stockert Oliver M. (Medical Scientist Training Program, University of Minnesota Medical School, Minneapolis, MN, USA) ,  Gravel Chandra M. (Program in Biochemistry, Mount Holyoke College, South Hadley, MA, USA) ,  Gravel Chandra M. (Department of Chemistry, Mount Holyoke College, South Hadley, MA, USA) ,  Berry Katherine E. (Program in Biochemistry, Mount Holyoke College, South Hadley, MA, USA) ,  Berry Katherine E. (Department of Chemistry, Mount Holyoke College, South Hadley, MA, USA)
資料名： Nature Protocols  (Nature Protocols)
巻： 17  号： 4  ページ： 941-961  発行年： 2022年 
JST資料番号： W4781A  ISSN： 1754-2189  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 文献レビュー  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： このプロトコルは,RNA-蛋白質相互作用を報告するin vivo系である細菌3ハイブリッド(B3H)アッセイを記述し,順および逆遺伝子実験の両方で実施できる。B3Hアッセイは,生きている大腸菌細胞の内部でのRNA-蛋白質相互作用の強さをレポーター遺伝子(here,lacZ)の転写に結びつける。B3H実験のための適切なベクターにRNAと蛋白質配列を挿入するためのプロトコルを示し,(2)定性的および定量的読出しの両方を有する推定RNA-蛋白質相互作用を検出し,そして(3)前方遺伝子変異誘発スクリーニングを行った。B3Hアッセイは,遺伝子分析のためのよく確立された細菌2ハイブリッド系上に構築される。結果として,蛋白質-蛋白質相互作用は,蛋白質変異体がそれらの機能性を維持するのを確実にするため,細菌2ハイブリッドアッセイとRNA相互作用とのタンデムで評価できる。B3H系は,RNA-蛋白質相互作用機構を分析する従来の生化学的方法に対する強力な補完であり,RNAと興味の蛋白質は精製する必要がなく,それらの相互作用は生きている細菌細胞内部の自然条件下で評価できる。一度クローニングが完了すると,1週間と1-2週間のスクリーニングでアッセイを完了できる。このプロトコルは,生きた細菌におけるRNA-蛋白質相互作用を分析するための3ハイブリッド系と,望ましい表現型を持つ蛋白質およびRNA変異体を同定するための相補的な前進遺伝学スクリーニングを記述する。Copyright The Author(s), under exclusive licence to Springer Nature Limited 2022 Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *相互作用 ,  *細菌 ,  大腸菌 ,  *RNA【核酸】 ,  アミノ酸配列 ,  *遺伝子 ,  *タンパク質 ,  突然変異体 ,  表現型 ,  変異誘発 ,  スクリーニング ,  ベクター
準シソーラス用語： ツーハイブリッド法 ,  lacZ ,  クローニング , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  生物学的機能  (EB03040U)

タイトルに関連する用語 (5件)： RNA-蛋白質相互作用 ,  順 ,  遺伝子解析 ,  細菌 ,  アッセイ