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J-GLOBAL ID：200903003006967200

RNAiライブラリーの酵素的構築方法

Inventor： 廣瀬 謙造 ,  白根 大資 ,  菅生 厚太郎 ,  並木 繁行 ,  飯野 正光
Applicant, Patent owner： 株式会社東京大学TLO
Agent (2)： 清水 初志 ,  新見 浩一
Gazette classification：再公表公報
Application number (International application number)：JP2004019612
Publication number (International publication number)：WO2005063980
Application date： Dec. 28, 2004
Publication date： Jul. 14, 2005
Summary：

本発明により、標的DNAから酵素的に系統的なRNAiライブラリーを調製する方法を提供する。本方法では、標的DNAは特定の遺伝子のcDNAやゲノム配列からだけではなく、cDNAライブラリーからも調製し得る。また、本発明はRNAiライブラリーから所望のサイレンシング活性を有するiRNA発現構築物を備えたクローンを選択し得るスクリーニング方法をも提供する。スクリーニングにおいては、レポータ遺伝子やネガティブ選択マーカーと標的DNAとを融合させることにより効率的な選択を可能にしている。

Claim (excerpt)：

以下の(1)〜(3)の工程を含む、所望の標的DNAからRNAiライブラリーを製造する方法。 (1)標的DNAをランダムに切断し、DNA断片を生成する工程、 (2)ヘアピン型アダプターを、前記DNA断片の一端に接続して、ヘアピン型のDNA断片を生成する工程、 (3)ヘアピン型のDNA断片をStrand-displacing活性を有するポリメラーゼを用いてプライマーエクステンションを実行させ、インターフェアレンスRNAをコードしたiRNA発現構築物を生成させる工程を含む、RNAiライブラリー製造方法。

IPC (3)：

C12N 15/09 ,  C12Q 1/02 ,  C12Q 1/68

FI (3)：

C12N15/00 A ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/68 A

F-Term (47)：

4B024AA11 ,  4B024AA20 ,  4B024BA80 ,  4B024CA04 ,  4B024CA05 ,  4B024CA06 ,  4B024CA07 ,  4B024CA09 ,  4B024CA11 ,  4B024CA12 ,  4B024DA02 ,  4B024EA02 ,  4B024EA04 ,  4B024FA02 ,  4B024FA10 ,  4B024GA11 ,  4B024GA18 ,  4B024HA08 ,  4B024HA09 ,  4B024HA12 ,  4B024HA14 ,  4B063QA01 ,  4B063QA18 ,  4B063QQ52 ,  4B063QQ53 ,  4B063QQ79 ,  4B063QQ89 ,  4B063QR08 ,  4B063QR33 ,  4B063QR35 ,  4B063QR36 ,  4B063QR42 ,  4B063QR55 ,  4B063QR59 ,  4B063QR66 ,  4B063QR69 ,  4B063QR77 ,  4B063QR82 ,  4B063QS05 ,  4B063QS12 ,  4B063QS16 ,  4B063QS24 ,  4B063QS25 ,  4B063QS28 ,  4B063QS34 ,  4B063QS36 ,  4B063QX02