微生物由来のインビトロ発現法またはインビボ発現法によって生産されたエリスロポエチンの突然変異体の修飾体およびその生産方法

Inventor： , , ,
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：河備健二
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2001047494
Publication number (International publication number)：2002209593
Application date： Feb. 23, 2001
Publication date： Jul. 30, 2002
Summary：

【要約】 (修正有)【課題】微生物のin vitro又はin vivo発現法から得られた、生物学的活性が増大した、エリスロポエチン(EPO)の修飾された突然変異体及びその生産方法の提供。【解決手段】生物学的活性をもつEPOの突然変異体の修飾体を生産する方法であって、修飾位置のアミノ酸に相応するコドンを、位置選択的突然変異法により、フレームシフトコドンに転換する工程;無細胞蛋白質生産において、tRNAに結合した非天然性アミノ酸をEPO蛋白質に結合させるために、フレームシフトコドンに相応するサプレッサーtRNAを含有させ、それによってEPOの突然変異体を生産する工程;及びEPOの突然変異体に少なくとも一つの修飾物質を結合させる工程からなることを特徴とするEPOの突然変異体の修飾体を生産する方法、及び該方法により得られるEPOの突然変異体の修飾体によって提供。

Claim (excerpt)：

生物学的活性をもつエリスロポエチン(EPO)の突然変異体の修飾体を生産する方法であって、修飾位置のアミノ酸に相応するコドンを、位置選択的突然変異法(site-directed mutagenesis)により、アンバーストップコドン(amber stop codon)、他のストップコドンまたはレアコドン(rare codon)を含むフレームシフトコドン(frameshiftcodon)に転換する工程、無細胞蛋白質生産において、tRNAに結合した非天然性アミノ酸をエリスロポエチン(EPO)蛋白質に結合させるために、その中に該アンバーストップコドン、他のストップコドンまたはレアコドンを含むフレームシフトコドンに相応するサプレッサー(suppressor)tRNAを含有させ、それによってエリスロポエチン(EPO)の突然変異体(ここで、該非天然アミノ酸に下記の修飾物質をあらかじめ結合させておいてもよい。)を生産する工程、およびエリスロポエチン(EPO)の突然変異体における一つまたはそれ以上の所望とする位置に、化学的反応、酵素的反応または化学的-酵素的反応により少なくとも一つの修飾物質(modifier(s))を結合させる工程からなることを特徴とするエリスロポエチン(EPO)の突然変異体の修飾体を生産する方法。

IPC (6)：

C12N 15/09 ZNA , A61K 38/22 , A61P 7/06 , A61P 43/00 105 , C07K 14/505 , C12P 21/02

FI (6)：

A61P 7/06 , A61P 43/00 105 , C07K 14/505 , C12P 21/02 C , C12N 15/00 ZNA A , A61K 37/24

F-Term (33)：

4B024AA01 , 4B024BA21 , 4B024CA04 , 4B024DA06 , 4B024EA04 , 4B024GA11 , 4B024GA19 , 4B024HA01 , 4B064AG18 , 4B064CA02 , 4B064CA19 , 4B064CA21 , 4B064CC24 , 4B064CE02 , 4B064CE10 , 4B064DA01 , 4C084AA06 , 4C084AA07 , 4C084BA44 , 4C084CA04 , 4C084DB56 , 4C084NA14 , 4C084ZA552 , 4C084ZB212 , 4H045AA10 , 4H045AA20 , 4H045BA57 , 4H045CA40 , 4H045DA13 , 4H045EA24 , 4H045FA70 , 4H045FA74 , 4H045GA21

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