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J-GLOBAL ID：200903034911481712

核酸の配列決定

Inventor： シブソン,デイビッド,ロス
Applicant, Patent owner： メディカル リサーチ カウンシル
Agent (1)： 松井 光夫
Gazette classification：公表公報
Application number (International application number)：1995519415
Publication number (International publication number)：1997508268
Application date： Jan. 20, 1995
Publication date： Aug. 26, 1997
Summary：

【要約】一度に所定の数の塩基を核酸の配列から逐次に除去すること(ここで所定の塩基除去の各工程から残った生成物は、該塩基に対し特異的でありかつオリゴヌクレオチド配列を含む標識されたアダプターにリゲートされる)、又はプライマーを配列決定される核酸にハイブリダイズし、そして該プライマーを一度に所定の数の塩基だけ逐次延長すること(ここで該加えられる塩基は配列決定される核酸中の塩基に相補的であり、該塩基付加工程の各々は、該塩基に対し特異的でありかつ該所定の塩基を含むオリゴヌクレオチド配列を含む標識されたアダプターの使用により達成される)を含み;いずれの場合にも該標識されたアダプターの標識はその夫々の所定の塩基に対し特異的であるところの、核酸を配列決定する方法。

Claim (excerpt)：

下記工程を含む、二本鎖核酸の集団を配列決定する方法 (a) その認識部位がその切断部位から離されている(転移されている:displaced)ところの核酸のための所定のヌクレアーゼ認識配列を含む二本鎖オリゴヌクレオチド配列を含むアダプターを該核酸にリゲートする、ここで該転位は、該リゲーションの結果として、得られたリゲーション生成物中に切断部位(これは、そこで切断すると、該核酸の一つの鎖から一又は複数の塩基の除去を結果する)を作るようなものである; (b) (a) からのリゲーション生成物を該ヌクレアーゼで切断して、不等の鎖長の二本鎖生成物を作る; (c) (b) からの該生成物を、延びる(extending)一本鎖を有する二本鎖オリゴヌクレオチド配列を含むアダプターの集団とのリゲーションに付す、ここでアダプターの該集団は、それらの延びる一本鎖内に、所定の数の塩基を構成する一又は複数の塩基の順列、任意的に全ての可能な順列を有する分子を含み、かつここで各順列は、夫々のユニークなかつ検出可能な標識を備えられており、該集団中の各アダプターは、その認識部位がその切断部位から離されているヌクレアーゼのためのヌクレアーゼ認識配列を有し、該転位は、この工程(c) のリゲーションの結果として、そこで開裂すると(b) からの該生成物の一つの鎖からの一又は複数の塩基の除去を結果する を作るようなものである; (d) (c) からのリゲーション生成物を分離する; (e) (c) からの分離されたリゲーション生成物を(c) のヌクレアーゼで開裂して、(c) のヌクレアーゼの認識部位を有するフラグメントの集団を作る; (f) (d) において分離されたリゲーション生成物により有される標識を分析するか、又は(e) からのフラグメントにより有される標識を分析する;そして (g) 所望の配列を決定するのに必要な回数、工程(c)〜(f)を繰返す、但し、最後の繰返しは任意的に工程(e)を省略する。