微量mRNA及びcDNAの増幅方法

Inventor：
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：廣田雅紀
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2001041428
Publication number (International publication number)：2002238575
Application date： Feb. 19, 2001
Publication date： Aug. 27, 2002
Summary：

【要約】【課題】 cDNAライブリーの作製、サブトラクションクローニング、マイクロアレイの作製・解析、遺伝子発現解析への適用が可能である超微量のmRNAを108倍程度増幅する方法を提供すること。【解決手段】オリゴ(dt)結合磁気ビーズに試料中のmRNAを吸着させた後、磁気ビーズ上で2重鎖cDNAを合成し、5′末端にT7プロモーター配列を有するリンカーを付加後、アンチセンス鎖cDNA結合磁気ビーズを除去し、上清中のセンス鎖cDNAを鋳型として、SP6プロモーター配列を有するリンカーを付加したオリゴ(dt)プライマーを用いて、2重鎖cDNAを再度合成し、この2重鎖cDNA両端のリンカー部分の既知配列をプライマーとしてPCRを行ってcDNA混成物を増幅する。また、かかるcDNA混成物を用いて、T7やSP6ポリメラーゼにより、センス鎖・アンチセンス鎖cRNAを合成する。

Claim (excerpt)：

以下の?@〜?Eの工程を含むことを特徴とする微量mRNAの増幅方法。?@試料中のmRNAを、オリゴ(dT)を結合させた担体に吸着させる工程;?A担体上でアンチセンス鎖cDNA及びセンス鎖cDNAを合成する工程;?B得られる2重鎖cDNAの少なくともセンス鎖の5′末端に第1のプロモーター配列を有するリンカーを付加する工程;?C2重鎖cDNAを解離させ、担体に結合したアンチセンス鎖cDNAを担体と共に除去する工程;?D解離したセンス鎖cDNAを鋳型として、第2のプロモーター配列を有するリンカーを付加したオリゴ(dT)プライマーを用いて、2重鎖cDNAを合成する工程;?E2重鎖cDNA両端のリンカー部分の配列をプライマーとしてPCRを行い、cDNA混成物を増幅する工程;

IPC (4)：

C12N 15/09 ZNA , C12N 15/09 , C12M 1/00 , C12Q 1/68

FI (4)：

C12M 1/00 A , C12Q 1/68 A , C12N 15/00 ZNA A , C12N 15/00 F

F-Term (19)：

4B024AA20 , 4B024CA04 , 4B024CA12 , 4B024FA02 , 4B024FA13 , 4B024HA19 , 4B029AA07 , 4B029AA21 , 4B029AA23 , 4B029FA12 , 4B063QA01 , 4B063QA13 , 4B063QQ53 , 4B063QR32 , 4B063QR36 , 4B063QR55 , 4B063QR62 , 4B063QS25 , 4B063QS34

Patent cited by the Patent：

Cited by examiner (1)

ポリヌクレオチド固定化担体
Gazette classification：公表公報 Application number：特願平5-513529 Applicant：日立化成工業株式会社

Article cited by the Patent：

Cited by examiner (2)

Return to Previous Page