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J-GLOBAL ID：200903041667657010

mRNA増幅

Inventor： ツォールンヘーフェル,ディートリンド ,  クレイン,クリストフ
Applicant, Patent owner： マイクロメット アーゲー
Agent (3)： 大野 聖二 ,  森田 耕司 ,  田中 玲子
Gazette classification：公表公報
Application number (International application number)：2001569407
Publication number (International publication number)：2004508010
Application date： Mar. 23, 2001
Publication date： Mar. 18, 2004
Summary：

本発明は,試料のmRNAを増幅する方法に関し,該方法は,i.)ポリアデニル化RNAにハイブリダイズし,かつ5’ポリ(C)または5’ポリ(G)フランクを含む少なくとも1つのプライマーを用いてポリアデニル化RNAからcDNAを生成し;ii.)(aa)ハイブリダイズしていない余剰のプライマーおよび/または余剰のdNTPが存在する場合にはこれを除去し;ii.)(ab)前記生成したcDNAを,工程iにおいて5’ポリ(C)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(G)テイルを用いて,または工程iにおいて5’ポリ(G)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(C)テイルを用いて3’テイリングを行い;またはii.)(b)余剰のプライマーおよび/または余剰のdNTPの存在または非存在にかかわらず,前記生成したcDNAを,工程iにおいて5’ポリ(C)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(G)テイルを用いて,または工程iにおいて5’ポリ(G)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(C)テイルを用いて,RNA-リガーゼを用いて3’テイリングを行い;iii.)テイリングしたcDNAを,工程ii(ab)またはii(b)において生成したテイルにハイブリダイズしたプライマーを用いて増幅する,の各工程を含む。本発明はさらに,mRNAの増幅の前記方法を用いて,試験試料において発現されている遺伝子を同定するために,病理学的状態の治療のための薬剤候補物を同定するために,および病理学的状態をインビトロで検出するために,インビトロ代用物を製造する方法に関する。本発明はさらに,本発明の方法により得られた増幅されたcDNAを,ハイブリダイゼーション,相互作用および/または酵素アレイにおいて用いることに関する。

Claim (excerpt)：

試料のmRNAを増幅する方法であって, i.ポリアデニル化RNAにハイブリダイズし,5’ポリ(C)または5’ポリ(G)フランクを含む少なくとも1つのプライマーを用いてポリアデニル化RNAからcDNAを生成し; ii.(aa)ハイブリダイズしていない余剰のプライマーおよび/または余剰のdNTPが存在する場合にはこれを除去し; (ab)前記生成したcDNAを,工程iにおいて5’ポリ(C)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(G)テイルを用いて,または工程iにおいて5’ポリ(G)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(C)テイルを用いて,3’テイリングを行い;または (b)余剰のプライマーおよび/または余剰のdNTPの存在または非存在にかかわらず,前記生成したcDNAを,工程iにおいて5’ポリ(C)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(G)テイルを用いて,または工程iにおいて5’ポリ(G)フランクを含むプライマーを用いた場合にはポリ(C)テイルを用いて,RNA-リガーゼを用いて3’テイリングを行い;そして iii.テイリングしたcDNAを,工程ii(ab)またはii(b)において生成したテイルにハイブリダイズするプライマーを用いて増幅する の各工程を含む方法。

IPC (8)：

C12N15/09 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/15 ,  G01N33/50 ,  G01N33/53 ,  G01N33/566 ,  G01N37/00

FI (8)：

C12N15/00 A ,  C12Q1/68 A ,  G01N33/15 Z ,  G01N33/50 Z ,  G01N33/53 M ,  G01N33/566 ,  G01N37/00 102 ,  C12N5/00 B

F-Term (57)：

2G045AA40 ,  2G045BA14 ,  2G045BB03 ,  2G045BB20 ,  2G045BB24 ,  2G045CA25 ,  2G045CB01 ,  2G045CB03 ,  2G045CB04 ,  2G045DA12 ,  2G045DA13 ,  2G045DA14 ,  2G045DA30 ,  2G045DA36 ,  2G045DA37 ,  2G045FA16 ,  2G045FB02 ,  2G045FB03 ,  4B024AA01 ,  4B024AA11 ,  4B024BA80 ,  4B024CA04 ,  4B024CA09 ,  4B024CA12 ,  4B024HA08 ,  4B024HA12 ,  4B063QA01 ,  4B063QA18 ,  4B063QA19 ,  4B063QQ02 ,  4B063QQ08 ,  4B063QQ53 ,  4B063QR08 ,  4B063QR14 ,  4B063QR20 ,  4B063QR36 ,  4B063QR42 ,  4B063QR50 ,  4B063QR55 ,  4B063QR56 ,  4B063QR62 ,  4B063QR66 ,  4B063QR72 ,  4B063QR77 ,  4B063QS03 ,  4B063QS24 ,  4B063QS25 ,  4B063QS28 ,  4B063QS34 ,  4B063QS36 ,  4B063QX02 ,  4B065AA90X ,  4B065AA90Y ,  4B065AA93Y ,  4B065AB01 ,  4B065CA44 ,  4B065CA46