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J-GLOBAL ID：200903044370361978

ピロホスフェートの放出の検出に基づくDNA配列決定方法

Inventor： ナイレン、パイ
Applicant, Patent owner： パイロシーケンシング・アーベー
Agent (1)： 山崎 行造 (外3名)
Gazette classification：公表公報
Application number (International application number)：1998528546
Publication number (International publication number)：2001506864
Application date： Dec. 22, 1997
Publication date： May. 29, 2001
Summary：

【要約】本発明は、試料DNA中の標的位置の塩基を同定する方法であって、試料DNA中の標的位置にすぐ隣接してハイブリダイズする伸長プライマーを用意し、試料DNAおよび伸長プライマーを、デオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドの存在下でポリメラーゼ反応に供し、それによりデオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドが標的位置の塩基と相補的である場合にのみ取り込まれてピロホスフェート(PPi)を放出するようにし、PPi放出を酵素により検出し、異なるデオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドを試料-プライマー混合物の別個のアリコートに、または同じ試料-プライマー混合物に連続的に添加し、ポリメラーゼ反応に供し、どのデオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドが取り込まれたかを示す方法であって、取り込まれなかったヌクレオチドが分解されるように、ヌクレオチド分解酵素をポリメラーゼ反応工程中に包含させる特徴とする方法を提供する。

Claim (excerpt)：

試料DNA中の標的位置の塩基を同定する方法であって、標的位置にすぐ隣 接して試料DNAにハイブリダイズする伸長プライマーを用意し、試料DN Aおよび伸長プライマーを、デオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレ オチドの存在下でポリメラーゼ反応に供し、それによりデオキシヌクレオチ ドまたはジデオキシヌクレオチドを、それが標的位置の塩基と相補的である 場合にのみ取り込まれてピロホスフェート(PPi)を放出するようにし、 PPiの放出を酵素的に検出し、異なるデオキシヌクレオチドまたはジデオ キシヌクレオチドを、試料-プライマー混合物の別個のアリコートに、また は同じ試料-プライマー混合物に連続的に添加して、ポリメラーゼ反応に供 し、どのデオキシヌクレオチドまたはジデオキシヌクレオチドが取り込まれ たかを示す方法であって、取り込まれなかったヌクレオチドが分解されるよ うにヌクレオチド分解酵素をポリメラーゼ反応工程中に包含させることを特 徴とする方法。