メチル化DNA検出方法およびその利用法

Inventor： ,
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：原謙三
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2004136550
Publication number (International publication number)：2005058217
Application date： Apr. 30, 2004
Publication date： Mar. 10, 2005
Summary：

【課題】細胞検体中の細胞から核酸を抽出する工程を省き、容易にかつ微量の細胞検体からメチル化されたDNAを検出することができる方法およびその利用法を提供する。【解決手段】細胞検体を溶解液により溶解させて細胞検体溶解液を調製する工程と、上記工程により得られる細胞検体溶解液を重亜硫酸塩含有試薬で処理し、当該細胞検体溶解液に含まれるCpG含有DNAの塩基配列中の非メチル化シトシンをウラシルへと変換する工程と、上記工程により得られるCpG含有DNAを、所定のメチル化特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応により増幅させる工程と、上記工程によって、上記CpG含有DNAが増幅されたか否かを検出する工程とを含む方法によれば、簡便かつ迅速にDNAのメチル化を検出することができる。【選択図】なし

Claim (excerpt)：

細胞検体を溶解液により溶解させて細胞検体溶解液を調製する細胞溶解工程と、上記細胞溶解工程により得られる細胞検体溶解液を重亜硫酸塩含有試薬で処理し、当該細胞検体溶解液に含まれるCpG含有DNAの塩基配列中の非メチル化シトシンをウラシルへと変換するDNA変換工程と、上記DNA変換工程により得られるCpG含有DNAを、所定のメチル化特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応により増幅させるDNA増幅工程と、上記DNA増幅工程によって、上記CpG含有DNAが増幅されたか否かを検出するメチル化検出工程と、を含むことを特徴とするメチル化DNA検出方法。

IPC (5)：

C12N15/09 , C12Q1/02 , C12Q1/68 , G01N33/53 , G01N33/566

FI (5)：

C12N15/00 A , C12Q1/02 , C12Q1/68 A , G01N33/53 M , G01N33/566

F-Term (23)：

4B024AA11 , 4B024AA20 , 4B024CA01 , 4B024HA11 , 4B024HA20 , 4B063QA01 , 4B063QA13 , 4B063QA17 , 4B063QA19 , 4B063QQ02 , 4B063QQ08 , 4B063QQ48 , 4B063QR08 , 4B063QR32 , 4B063QR35 , 4B063QR40 , 4B063QR42 , 4B063QR50 , 4B063QR52 , 4B063QR62 , 4B063QS16 , 4B063QS25 , 4B063QX01

Patent cited by the Patent：

Cited by applicant (2)

メチル化特異的検出
Gazette classification：公表公報 Application number：特願平10-500779 Applicant：ザジョーンズホプキンスユニバーシティースクールオブメディシン
国際公開第02/38801 A1号パンフレット(2002年 5月16日国際公開)

Cited by examiner (1)

メチル化特異的検出
Gazette classification：公表公報 Application number：特願平10-500779 Applicant：ザジョーンズホプキンスユニバーシティースクールオブメディシン

Article cited by the Patent：

Cited by examiner (12)

Biotechniques, vol. 27, pages 744-752 (1999)
Biotechniques, vol. 27, pages 744-752 (1999)
Biotechniques, vol. 27, pages 744-752 (1999)

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