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J-GLOBAL ID：201303008208160140

新規DNA結合ドメインおよびそれを含む新規DNA切断酵素

Inventor： 山本 卓 ,  坂本 尚昭 ,  佐久間 哲史 ,  野地 澄晴
Applicant, Patent owner： 国立大学法人広島大学
Agent (4)： 田中 光雄 ,  山崎 宏 ,  冨田 憲史 ,  志賀 美苗
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2011242250
Publication number (International publication number)：2013094148
Application date： Nov. 04, 2011
Publication date： May. 20, 2013
Summary：

【課題】どのような塩基配列でも自由に標的遺伝子とすることでき、かつ正確な結合特異性を有する人工DNA結合ドメインを提供すること。【解決手段】標的配列を特異的に認識して結合するDNA結合タンパク質であって、N末端から順番に以下のドメインを含んでなるDNA結合タンパク質を提供する: (1)250〜312アミノ酸長であるドメイン;(2-1)TALEの標的配列認識ドメインまたはTALEの変異型標的配列認識ドメイン;(2-2)TALEの標的配列認識最終ドメインまたはTALEの変異型標的配列認識最終ドメイン;(3)7から8塩基対からなる標的配列に相当する長さを有するドメイン;および、(4)ジンクフィンガードメインまたは変異型ジンクフィンガードメイン。【選択図】なし

Claim (excerpt)：

標的配列を特異的に認識して結合するDNA結合タンパク質であって、N末端から順番に以下のドメインを含んでなるDNA結合タンパク質、ここで、標的配列は二本鎖DNAであり、その塩基配列が5’末端側から順に、以下のドメイン(2-1)および(2-2)によって認識されるn+1塩基対からなるTALE認識配列を含み、かつ、該TALE認識配列から7または8塩基対のスペースを空けて、以下のドメイン(4)によって認識される3塩基対からなるジンクフィンガー認識配列を含むものである: (1)250〜312アミノ酸長であるドメイン; (2-1)アミノ酸配列:LTPDQVVAIASX1X2GGKQALETVQRLLPVLCQDHG(配列番号2)からなる1塩基認識繰り返しドメインをn個タンデムに含んでなるTALEの標的配列認識ドメイン、または、配列番号2で示されるアミノ酸配列のX1X2以外の位置において1または数個のアミノ酸の欠失、置換および/または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつ、前記DNA結合タンパク質全体としての標的配列特異的DNA結合活性を破壊しないTALEの変異型標的配列認識ドメイン、 配列番号2のアミノ酸配列において、 X1X2が、NIの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Aを認識し、 X1X2が、HDの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Cを認識し、 X1X2が、NNまたはNKの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Gを認識し、そして、 X1X2が、NGの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Tを認識し、 nは7〜30の整数である; (2-2)アミノ酸配列:LTPDQVVAIASX3X4GGKQALE(配列番号3)からなる1個の1塩基認識最終繰り返しドメインからなるTALEの標的配列認識最終ドメイン、または、配列番号3で示されるアミノ酸配列のX3X4以外の位置において1または数個のアミノ酸の欠失、置換および/または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつ、前記DNA結合タンパク質全体としての標的配列特異的DNA結合活性を破壊しないTALEの変異型標的配列認識最終ドメイン、 配列番号3のアミノ酸配列において、 X3X4が、NIの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Aを認識し、 X3X4が、HDの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Cを認識し、 X3X4が、NNまたはNKの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Gを認識し、そして、 X3X4が、NGの場合、その1塩基認識繰り返しドメインは塩基Tを認識する; (3)7から8塩基対からなる標的配列に相当する長さを有するドメイン;および、 (4)配列番号5から20のいずれかに示されるアミノ酸配列を有する1個のジンクフィンガードメイン、または、配列番号5から20のいずれかに示されるアミノ酸配列において1または数個のアミノ酸の欠失、置換および/または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつ、前記DNA結合タンパク質全体としての標的配列特異的DNA結合活性を破壊しない変異型ジンクフィンガードメイン、 ここで、 配列番号5からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GAAを認識し、 配列番号6からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GACを認識し、 配列番号7からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GAGを認識し、 配列番号8からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GATを認識し、 配列番号9からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GCAを認識し、 配列番号10からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GCCを認識し、 配列番号11からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GCGを認識し、 配列番号12からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GCTを認識し、 配列番号13からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GGAを認識し、 配列番号14からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GGCを認識し、 配列番号15からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GGGを認識し、 配列番号16からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GGTを認識し、 配列番号17からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GTAを認識し、 配列番号18からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GTCを認識し、 配列番号19からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GTGを認識し、 配列番号20からなるジンクフィンガードメインは、塩基配列GTTを認識する。

IPC (9)：

C12N 15/09 ,  C07K 14/195 ,  C12N 9/10 ,  C07K 19/00 ,  A01K 67/027 ,  C12N 1/15 ,  C12N 1/19 ,  C12N 1/21 ,  C12N 5/10

FI (9)：

C12N15/00 A ,  C07K14/195 ,  C12N9/10 ,  C07K19/00 ,  A01K67/027 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/00 101

F-Term (34)：

4B024AA01 ,  4B024AA11 ,  4B024BA10 ,  4B024CA01 ,  4B024FA20 ,  4B024GA11 ,  4B024HA08 ,  4B024HA11 ,  4B050CC05 ,  4B050DD02 ,  4B050EE10 ,  4B050LL01 ,  4B050LL03 ,  4B050LL10 ,  4B065AA56Y ,  4B065AA90Y ,  4B065AA91X ,  4B065AB01 ,  4B065AC14 ,  4B065BA02 ,  4B065CA24 ,  4B065CA29 ,  4B065CA44 ,  4B065CA46 ,  4B065CA60 ,  4H045AA10 ,  4H045BA10 ,  4H045BA41 ,  4H045BA50 ,  4H045CA11 ,  4H045EA20 ,  4H045EA50 ,  4H045FA40 ,  4H045FA74