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J-GLOBAL ID：201303088553564207
組換え酵素を用いた遺伝子増幅方法
Inventor：
,
,
Applicant, Patent owner：
Agent (5)：
小野 新次郎
, 小林 泰
, 千葉 昭男
, 富田 博行
, 野▲崎▼ 久子
Gazette classification：特許公報
Application number (International application number)：2008034640
Publication number (International publication number)：2009189318
Patent number：4883532
Application date： Feb. 15, 2008
Publication date： Aug. 27, 2009
Claim (excerpt)：
【請求項1】組換え酵素Creと、
スペーサー領域、並びにその左右にそれぞれ配置された左アーム領域及び右アーム領域からなる、Creのターゲットサイトと
を用いる遺伝子組換え方法であって:
(A) スペーサー領域1、変異のある一方のアーム領域、及び野生型である他方のアーム領域からなるターゲットサイト1であって、宿主染色体に導入されたもの;
(B) 遺伝子1、及び遺伝子1の両側にそれぞれ連結されたターゲットサイト2及びターゲットサイト3を含む組込カセットであって、
このときターゲットサイト2は、スペーサー領域1、及び変異のある、ターゲットサイト1とは反対側であって、かつ遺伝子1に近い側である一方のアーム領域、及び野生型である他方のアーム領域からなり、そして
ターゲットサイト3は、スペーサー領域1とは独立して機能可能なスペーサー領域2、及び変異のある、ターゲットサイト1と同じ側であって、かつ遺伝子1に近い側である一方のアーム領域、及び野生型である他方のアーム領域からなるもの;及び
(C) 遺伝子2、遺伝子2の両側にそれぞれ連結されたターゲットサイト4及びターゲットサイト5を含む置換カセットであって、
このときターゲットサイト4は、スペーサー領域2、及び変異のある、ターゲットサイト1とは反対側であって、かつ遺伝子2に近い側の一方のアーム領域、及び野生型である他方のアーム領域からなるもの
このときターゲットサイト5は、スペーサー領域3(但し、スペーサー領域3は、スペーサー領域1と同じか、又はスペーサー領域1及び2各々とは独立して機能可能なものである。)、及び変異のある、ターゲットサイト1と同じ側であって、かつ遺伝子2に近い側の一方のアーム領域、及び野生型である他方のアーム領域からなるもの
を準備し;
(1) ターゲットサイト1と組込カセットとを、Creによって反応させ、反応生成物を得る工程;そして
(2) 該反応生成物と置換カセットとを、Creよって反応させる
工程を含む、染色体上で2以上の組換えを行うための、遺伝子組換え方法であって、
スペーサー領域1及び2の一方が、
配列番号:10のヌクレオチド配列からなり、
スペーサー領域1及び2の他方が、
配列番号:11のヌクレオチド配列からなり;
変異のある左アーム領域が、
配列番号:9からなるものであり;
変異のある右アーム領域が、
配列番号:12からなるものであり;
野生型左アーム領域が、配列番号:8のヌクレオチド配列からなるものであり;そして
野生型右アーム領域が、配列番号:13のヌクレオチド配列からなるものである、方法。
IPC (2)：
C12N 15/09 ( 200 6.01)
, C12N 9/16 ( 200 6.01)
C12N 15/00 ZNA A
, C12N 9/16 Z
Cited by examiner (5)
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The Plant Journal, 1995, Vol. 7(4), pp. 649-659
-
Nucleic Acids Research, 1997, Vol. 25, No. 4, pp. 868-872
-
BMC genomics, 200604, 7:73, 1-13
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