Pat
J-GLOBAL ID：201403076819303446
赤色蛍光蛋白質を用いたカルシウムセンサー蛋白質
Inventor：
,
Applicant, Patent owner：
Agent (2)：
奥原 康司
, 関本 澄人
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2012137434
Publication number (International publication number)：2014001161
Application date： Jun. 19, 2012
Publication date： Jan. 09, 2014
Summary：
【課題】 本発明は、生体内(細胞外および細胞内)のカルシウム変動を探知し、カルシウム濃度を測定するのに用いられる、従来のものよりも更に反応性に優れた赤色蛍光カルシウムセンサーの提供を目的とする。【解決手段】 蛍光特性に影響を及ぼすホットスポットアミノ酸残基の近傍で赤色蛍光タンパク質mAppleの構造を改変し、蛍光特性を変化させるように機能する機能性分子を連結し、そのC末端領域に特定の15アミノ酸からなるリンカーペプチド及び22アミノ酸からなる特定のペプチドを付加した改変体であって、高い蛍光反応性を示し、かつ、核内への局在を示さない赤色蛍光カルシウムセンサー蛋白質。【選択図】なし
Claim (excerpt)：
下記(a)〜(k)のアミノ酸配列を、N末端から順に有することを特徴とするカルシウムセンサー蛋白質:
(a)配列番号1で示されるアミノ酸配列;
(b)3つのアミノ酸からなる配列 Met-Xaa1-Xaa2(ここでXaa1及びXaa2はそれぞれ独立して任意のアミノ酸である)(リンカーA)(配列番号2);
(c)ミオシン軽鎖キナーゼ蛋白質、又はカルモジュリン結合部位を含むその部分アミノ酸配列;
(d)前記(c)の配列と後記(e)の配列とを連結する、Iso-Iso、Iso-Leu、Iso-Met、Iso-Pro、Iso-Val、Iso-Gly、Iso-Ala、Leu-Iso、Leu-Leu、Leu-Met、Leu-Pro、Leu-Val、Leu-Gly、Leu-Ala、Met-Iso、Met-Leu、Met-Met、Met-Pro、Met-Val、Met-Gly、Met-Ala、Pro-Iso、Pro-Leu、Pro-Met、Pro-Pro、Pro-Val、Pro-Gly、Pro-Ala、Val-Iso、Val-Leu、Val-Met、Val-Pro、Val-Val、Val-Gly、Val-Ala、Gly-Iso、Gly-Leu、Gly-Met、Gly-Pro、Gly-Val、Gly-Gly、Gly-Ala、Ala-Iso、Ala-Leu、Ala-Met、Ala-Pro、Ala-Val、Ala-Gly及びAla-Alaからなる群より選択される何れか一のアミノ酸配列(リンカーB);
(e)配列番号3で示される配列のX番目〜236番目までのアミノ酸配列であって、151番目及び/又は152番目及び/又は169番目及び/又は171番目及び/又は219番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したもの(ここで、Xは151〜153の任意の位置である);
(f)前記(e)の配列と後記(g)の配列を連結する、6つのアミノ酸配列からなる配列Gly-Gly-Xaa5-Gly-Gly-Xaa6(ここでXaa5及びXaa6はそれぞれ独立して任意のアミノ酸である)(配列番号4);
(g)配列番号3で示される配列の1番目〜Y番目までのアミノ酸配列であって、
1番目及び/又は8番目及び/又は52番目及び/又は54番目及び/又は76番目及び/又は136番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したアミノ酸配列(ここで、Yは144〜150の任意の位置である);
(h)前記(g)の配列と後記(i)の配列とを連結するアミノ酸配列Thr-Arg、Phe-Arg、Trp-Arg、Tyr-Arg、Gly-Arg、Ala-Arg又はThr(リンカーC);
(i)配列番号9で示される配列の2番目〜148番目までのアミノ酸配列であって、63番目及び/又は77番目及び/又は101番目及び/又は111番目及び/又は127番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したアミノ酸配列;
(j)前記(i)の配列と後記(k)の配列とを連結する、15個のアミノ酸配列からなる配列Gly-Gly-Gly-Xaa7-Gly-Gly-Xaa8-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Xaa9-Xaa10(ここでXaa7、Xaa8、Xaa9及びXaa10はそれぞれ独立して任意のアミノ酸である)(リンカーD)(配列番号10);
(k)Pro-Val-Lys-Gln-Thr-Leu-Asn-Phe-Asp-Leu-Leu-Lys-Leu-Ala-Gly-Asp-Val-Glu-Ser-Asn-Pro-Gly(配列番号12)、Gln-Cys-Thr-Asn-Tyr-Ala-Leu-Leu-Lys-Leu-Ala-Gly-Asp-Val-Glu-Ser-Asn-Pro-Gly(配列番号13)、Glu-Gly-Arg-Gly-Ser-Leu-Leu-Thr-Cys-Gly-Asp-Val-Glu-Glu-Asn-Pro-Gly(配列番号14)又はAla-Thr-Asn-Phe-Ser-Leu-Leu-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val-Glu-Glu-Asn-Pro-Gly(配列番号15)のいずれかのアミノ酸配列。
IPC (3)：
C07K 19/00
, C12N 15/09
, C07K 14/00
C07K19/00
, C12N15/00 A
, C07K14/00
4B024AA11
, 4B024BA80
, 4B024CA04
, 4B024DA02
, 4B024DA06
, 4B024EA04
, 4B024GA11
, 4B024HA01
, 4B024HA11
, 4H045AA10
, 4H045AA20
, 4H045AA30
, 4H045BA41
, 4H045CA20
, 4H045CA50
, 4H045EA50
, 4H045FA74
