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J-GLOBAL ID：201403093497383599
核酸クロマトグラフ法を利用した肺炎原因菌の検出方法
Inventor：
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Applicant, Patent owner：
Agent (1)：
廣田 雅紀
Gazette classification：特許公報
Application number (International application number)：2012508098
Patent number：5565781
Application date： Mar. 30, 2011
Claim (excerpt)：
【請求項1】ストレプトコッカス・ニューモニエ、ヘモフィルス・インフルエンザ、マイコプラズマ・ニューモニエ、クラミドフィラ・ニューモニエ、レジオネラ・ニューモフィラ、クレブシエラ・ニューモニエ、シュードモナス・アエルギノーサ、モラクセラ・カタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス(MRSA)、スタフィロコッカス・アウレウスから選ばれる少なくとも3種類の肺炎菌類を検出対象とする肺炎原因菌の検出方法であって、以下の工程(a)〜工程(f)を備え、
1)試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸を、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のNASBAマルチプレックスプライマー対のセットを用いて1本鎖核酸として増幅する工程(a);
2)増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプローブ対を調製する工程(b);
3)標識高分子担体に少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブを結合させ、第1プローブ結合標識高分子担体を調製する工程(c);
4)第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブを、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化した第2プローブ担持展開支持体を調製する工程(d);
5)前記増幅産物を、展開支持体に担持された第2プローブ及び標識高分子担体に結合した第1プローブにハイブリダイズさせて検出する工程(e);
6)検出像を判定することにより評価する工程(f);
かつ、上記工程(a)において用いられる肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のNASBAマルチプレックスプライマー対のセットが、以下の(i)〜(x)に表されるプライマー対、あるいは、
かかるプライマー対を構成する配列番号21〜40に示されるヌクレオチド配列において、1〜3個の塩基が欠失、置換又は付加されたヌクレオチド配列から構成され、各肺炎菌特異的な標的核酸を増幅することができるプライマー対から選ばれることを特徴とする検出方法。
(i)配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(ii)配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(iii)配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(iv)配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(v)配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(vi)配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(vii)配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(viii)配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(ix)配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
(x)配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;
IPC (3)：
C12N 15/09 ( 200 6.01)
, C12Q 1/68 ( 200 6.01)
, G01N 33/569 ( 200 6.01)
C12N 15/00 ZNA A
, C12Q 1/68 A
, G01N 33/569 F
