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J-GLOBAL ID：201503021104076220
外来DNA断片由来の逆方向反復配列を含むDNA断片の調製方法及びDNA型RNAiライブラリの調製方法
Inventor：
,
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：
特許業務法人特許事務所サイクス
Gazette classification：特許公報
Application number (International application number)：2009287565
Publication number (International publication number)：2011125278
Patent number：5665110
Application date： Dec. 18, 2009
Publication date： Jun. 30, 2011
Claim (excerpt)：
【請求項1】標的遺伝子ダイレクトリピート(以下、DRと表記する)構造を有するプラスミドの調製方法であって、
(1)1つの標的遺伝子を有するプラスミド(プラスミドSと呼ぶ)を調製する工程、
但し、前記プラスミドSは、標的遺伝子の両側のそれぞれにニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位を有し、かつ各ニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位の標的遺伝子側に、DR構造が形成された時に、その間のスペーサー領域に制限酵素認識部位が生成されるための一部配列(制限酵素認識部位生成用部位)を有する、
(2)前記プラスミドSにニックを生じさせる工程、
(3)ニックを生じたプラスミドSに鎖置換反応及び引き続き行われるセルフライゲーション反応により、DR構造に変換した標的遺伝子を有するプラスミドを調製する工程、
但し、調製した標的遺伝子DR構造を有するプラスミドには、前記制限酵素認識部位生成用部位によって、2つの制限酵素認識部位が新たに形成される、
(4)標的遺伝子DR構造を有するプラスミドを含むプラスミド群を、宿主に導入し、得られた形質転換体を用いてクローニングする工程、
(5)クローニングしたプラスミド群を前記新たに形成された2つの制限酵素認識部位に対する2つの制限酵素で消化する工程、及び
(6)消化したプラスミド群から、制限酵素で消化されて直鎖状になったプラスミドを回収する工程、
を含む、標的遺伝子DR構造を有するプラスミドの調製方法。
IPC (6)：
C12N 15/113 ( 201 0.01)
, C12N 15/09 ( 200 6.01)
, C12N 5/10 ( 200 6.01)
, C12N 1/19 ( 200 6.01)
, C12Q 1/68 ( 200 6.01)
, C12Q 1/02 ( 200 6.01)
C12N 15/00 ZNA G
, C12N 15/00 A
, C12N 5/00 102
, C12N 5/00 103
, C12N 1/19
, C12Q 1/68 A
, C12Q 1/02
