細胞内分析のためのナノピペット装置および方法

Inventor： , ,
Applicant, Patent owner：
Agent (3)：杉村憲司 , 山口雄輔 , 瀬沼宗一郎
Gazette classification：公表公報
Application number (International application number)：2016501941
Publication number (International publication number)：2016512436
Application date： Mar. 13, 2014
Publication date： Apr. 28, 2016
Summary：

本明細書に記載したのは、生細胞から細胞物質を抽出し、その抽出物をナノリットルスケールの容器に配置するための装置及び方法である。走査型イオンコンダクタンス顕微鏡(SICM)に統合したナノピペットを用いて、ヒトBJ線維芽細胞由来のミトコンドリアDNAを抽出し、HeLa/GFP細胞由来の緑色蛍光タンパク質(GFP)転写を、細胞の内環境の破壊を最小化し、そして、分離するサンプルを獲得する前に化学的処置を行うことなく、達成する。抽出の成功可否は、抽出物質を蛍光顕微鏡検査およびPCR分析をすることにより確認する。本発明に係る方法と装置は、多くの異なる種類の細胞および細胞内標的に適応させことができ、単一細胞分析だけでなく、天然状態で抽出した物質について単一細胞内コンパートメント分析を実行することも可能とする。

Claim (excerpt)：

単一細胞由来の細胞内含有物を抽出する装置であって: (a)xyzコントローラに搭載され、ナノピペットの内部の第1疎水性電解液と共に用いるために適応させた第1電極に取り付けられたナノピペットと; (b)ナノピペットの外側にあり、細胞の外側に接触する第2の異なる電解液と接触するように配置し、適応させた第2電極と; (c)電流検出回路および電圧制御回路と;を備え、前記電流検出回路は電極間のイオン電流を検出し、前記電圧制御回路は、所定の時間で第1電極と第2電極との間の電圧を逆転することにより、液体のナノピペットへの流入及び流出を制御する、装置。

IPC (4)：

C12M 1/00 , C12N 15/09 , G01N 33/68 , G01N 33/50

FI (4)：

C12M1/00 A , C12N15/00 A , G01N33/68 , G01N33/50 P

F-Term (37)：

2G045AA25 , 2G045CB01 , 2G045DA14 , 2G045DA36 , 4B024AA11 , 4B024CA01 , 4B024CA11 , 4B024GA30 , 4B024HA12 , 4B029AA07 , 4B029AA09 , 4B029AA23 , 4B029AA27 , 4B029BB11 , 4B029CC01 , 4B029FA12 , 4B029FA15 , 4B029GA02 , 4B029GB05 , 4B029HA01 , 4B029HA07 , 4B029HA10 , 4B063QA01 , 4B063QA19 , 4B063QQ08 , 4B063QQ42 , 4B063QQ53 , 4B063QQ59 , 4B063QR32 , 4B063QR55 , 4B063QR62 , 4B063QS12 , 4B063QS25 , 4B063QS28 , 4B063QS33 , 4B063QS34 , 4B063QX02

Article cited by the Patent：

Cited by examiner (1)

Francois O., et al., "Electrochemical attosyringe" July 17, 2007PNAS vol. 104 no. 29 pp. 11895-

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