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J-GLOBAL ID：201703004399573029

生体試料中の目的とする細胞を検出する方法

Inventor： 北村 裕介 ,  井原 敏博 ,  中島 雄太
Applicant, Patent owner： 国立大学法人 熊本大学
Agent (6)： 小野 新次郎 ,  小林 泰 ,  竹内 茂雄 ,  山本 修 ,  泉谷 玲子 ,  松山 美奈子
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2015211094
Publication number (International publication number)：2017079634
Application date： Oct. 27, 2015
Publication date： May. 18, 2017
Summary：

【課題】癌の予後及び治療奏功に深く関する血中循環腫瘍細胞(CTC)について、診断時間の短縮と安価に行う、生体試料中の目的とする細胞を検出する方法の提供。【解決手段】下記の工程(1)〜(3)を含む方法。(1)以下の物質を準備する工程(i)-(iii):(i)鋳型核酸、並びに、発シグナル分子修飾核酸プローブ及びシグナル抑制分子修飾核酸プローブ、を含む核酸複合体、(ii)標的細胞の細胞表面物質に特異的に結合する核酸アプタマー、及び、トリガー核酸、を含む核酸アプタマー複合体、並びに、(iii)燃料核酸、(2)キャリアー上に捕捉されている細胞を含む溶液に、工程(1)の核酸アプタマー複合体、核酸複合体、及び燃料核酸を加える工程、(3)シグナルを検出する工程【選択図】なし

Claim (excerpt)：

生体試料中の目的とする細胞を検出する方法であって、 (1)以下の物質(i)-(iii): (i)4種類のセグメントが連結した配列(第1a配列、第2a配列、第3a配列、第4a配列)を含む鋳型核酸、並びに、鋳型核酸と二本鎖を形成した、発シグナル分子修飾核酸プローブ及びシグナル抑制分子修飾核酸プローブ、を含む核酸複合体、 ここにおいて、発シグナル分子修飾核酸プローブ及びシグナル抑制分子修飾核酸プローブは、以下の(a)又は(b)の組み合わせ (a)第1a配列に相補的な第1b配列が発シグナル分子で修飾された、発シグナル分子修飾核酸プローブと、第2a配列+第3a配列に相補的な第2b配列+第3b配列がシグナル抑制分子で修飾されたシグナル抑制分子修飾核酸プローブの組み合わせ、又は (b)第1a配列に相補的な第1b配列がシグナル抑制分子で修飾された、シグナル抑制分子修飾核酸プローブと、第2a配列+第3a配列に相補的な第2b配列+第3b配列が発シグナル分子で修飾された発シグナル分子修飾核酸プローブの組み合わせ、 から選択され、 ここにおいて、発シグナル分子とシグナル抑制分子は、鋳型核酸と二本鎖を形成している際はシグナルが抑制されるように近接して存在する、 (ii)目的とする細胞の細胞表面物質に特異的に結合する核酸アプタマー、及び、当該核酸アプタマーの一部分に相補的な塩基配列を有し、アプタマーの一部分に塩基対結合して二本鎖を形成しているトリガー核酸、を含む核酸アプタマー複合体、ここにおいて、トリガー核酸は、第3a配列+第4a配列に相補的な第3b配列+第4b配列の塩基配列を含む、並びに、 (iii)第1a配列+第2a配列+第3a配列に相補的な第1b配列+第2b配列+第3b配列の塩基配列を含む、燃料核酸、 を準備する工程; (2)キャリアー上に捕捉されている細胞を含む溶液に、工程(1)の核酸アプタマー複合体、核酸複合体、及び燃料核酸を加える工程、ここにおいて、核酸アプタマー複合体から放出されたトリガー核酸により、シグナルが増幅される;そして、 (3)シグナルを検出する工程、 含む、前記方法。

IPC (7)：

C12Q 1/68 ,  G01N 33/48 ,  G01N 33/566 ,  G01N 33/53 ,  G01N 33/543 ,  G01N 33/574 ,  C12N 15/09

FI (7)：

C12Q1/68 A ,  G01N33/48 M ,  G01N33/566 ,  G01N33/53 Y ,  G01N33/543 525E ,  G01N33/574 D ,  C12N15/00 A

F-Term (40)：

2G045AA01 ,  2G045AA24 ,  2G045AA25 ,  2G045AA26 ,  2G045CA02 ,  2G045CA11 ,  2G045CA23 ,  2G045CA25 ,  2G045CA26 ,  2G045CB07 ,  2G045CB11 ,  2G045CB12 ,  2G045CB17 ,  2G045CB26 ,  2G045DA36 ,  2G045FA11 ,  2G045FA19 ,  2G045FB02 ,  2G045FB05 ,  2G045FB12 ,  2G045FB13 ,  2G045FB15 ,  2G045GA08 ,  2G045GC15 ,  2G045JA01 ,  2G045JA07 ,  4B024AA11 ,  4B024CA01 ,  4B024CA09 ,  4B024HA12 ,  4B063QA01 ,  4B063QA18 ,  4B063QQ02 ,  4B063QQ42 ,  4B063QR32 ,  4B063QR55 ,  4B063QR82 ,  4B063QS24 ,  4B063QS36 ,  4B063QX02