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J-GLOBAL ID：201703021280594798

Cas9 mRNAを哺乳動物の受精卵にエレクトロポレーションにより導入する方法

Inventor： 橋本 昌和 ,  竹本 龍也
Applicant, Patent owner： 国立大学法人徳島大学 ,  橋本 昌和 ,  株式会社ベックス
Agent (2)： 松谷 道子 ,  櫻井 陽子
Gazette classification：再公表公報
Application number (International application number)：JP2016054735
Publication number (International publication number)：WO2016133165
Application date： Feb. 18, 2016
Publication date： Aug. 25, 2016
Summary：

本発明は、哺乳動物の受精卵にCas9タンパク質をコードするmRNA(Cas9 mRNA)を導入する方法であって、(a)エレクトロポレーション用電極の間に、Cas9 mRNAを含む溶液および受精卵の混合物を置くこと、(b)Cas9 mRNA濃度c(ng/μl)から算出される最低mRNA導入効率(Rmin)以上のmRNA導入効率(R)を達成する電圧と通電時間で、電極間に電圧をかけること、の各段階を含む方法に関する。

Claim (excerpt)：

哺乳動物の受精卵にCas9タンパク質をコードするmRNA(Cas9 mRNA)を導入する方法であって、 (a)エレクトロポレーション用電極の間に、Cas9 mRNAを含む溶液および受精卵の混合物を置くこと、 (b)下式(A)によりCas9 mRNA濃度c(ng/μl)から算出される最低mRNA導入効率(Rmin)以上のmRNA導入効率(R)を達成する電圧と通電時間で、電極間に電圧をかけること、 式(A) Rmin=882/c ただし、mRNA導入効率(R)は、通電時間t(msec)から、 電圧が電極間距離1mm当たり約20Vないし約30Vのとき、式(I)R=0.0005×t3-0.0057×t2+0.2847×tにより、 電圧が電極間距離1mm当たり約30Vないし約40Vのとき、式(II)R=0.0015×t3-0.0191×t2+0.9489×tにより、 電圧が電極間距離1mm当たり約40Vないし約50Vのとき、式(III)R=0.0005×t3+0.0508×t2+0.9922×tにより、 電圧が電極間距離1mm当たり約50V以上のとき、式(IV)R=0.0078×t3-0.1414×t2+3.0103×tにより、算出される値である、 ただし、電圧は電極間距離1mm当たり約20Vないし約55Vであり、電圧と通電時間の積は、電極間距離1mm当たり約990Vmsec以下である、 の各段階を含む、方法。

IPC (2)：

C12N 15/09 ,  A01K 67/027

FI (2)：

C12N15/00 A ,  A01K67/027

F-Term (3)：

4B029AA24 ,  4B029BB11 ,  4B029CC01