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J-GLOBAL ID：201903007082326186

タンパク質-RNA相互作用の検出

Inventor： 増田 章男 ,  大野 欽司
Applicant, Patent owner： 国立大学法人名古屋大学
Agent (1)： 萩野 幹治
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2017137406
Publication number (International publication number)：2019017281
Application date： Jul. 13, 2017
Publication date： Feb. 07, 2019
Summary：

【課題】より簡便かつ短時間で、しかも少量の試料であっても生体内タンパク質-RNA相互作用の解析を可能にする、新たな手法を提供することを課題とする。【解決手段】(1)供試細胞内のタンパク質-RNA結合を架橋するステップ、(2)ステップ(1)後の供試細胞を溶解し、細胞溶解液を調製するステップ、(3)細胞溶解液中の標的タンパク質-RNA複合体を、標的特異的抗体を介してビーズ上に捕捉するステップ、(4)ビーズを回収し、捕捉された標的タンパク質-RNA複合体をエンドヌクレアーゼで処理するステップ、(5)ステップ(4)後のビーズ上の標的タンパク質-RNA複合体を5'→3'エキソヌクレアーゼで処理するステップ、(6)ステップ(5)後のビーズ上の標的タンパク質-RNA複合体をプロテアーゼで処理するステップ、(7)ステップ(6)の処理液からRNAを回収し、シーケンシング解析するステップを含む、タンパク質-RNA相互作用を検出する方法が提要される。【選択図】図1

Claim (excerpt)：

以下のステップ(1)〜(7)を含む、タンパク質-RNA相互作用を検出する方法: (1)供試細胞内のタンパク質-RNA結合を架橋するステップ、 (2)ステップ(1)後の供試細胞を溶解し、細胞溶解液を調製するステップ、 (3)細胞溶解液中の標的タンパク質-RNA複合体を、標的特異的抗体を介してビーズ上に捕捉するステップ、 (4)ビーズを回収し、捕捉された標的タンパク質-RNA複合体をエンドヌクレアーゼで処理するステップ、 (5)ステップ(4)後のビーズ上の標的タンパク質-RNA複合体を5'→3'エキソヌクレアーゼで処理するステップ、 (6)ステップ(5)後のビーズ上の標的タンパク質-RNA複合体をプロテアーゼで処理するステップ、 (7)ステップ(6)の処理液からRNAを回収し、シーケンシング解析するステップ。

IPC (3)：

C12Q 1/68 ,  G01N 33/50 ,  G01N 33/543

FI (3)：

C12Q1/68 Z ,  G01N33/50 P ,  G01N33/543 541A

F-Term (13)：

2G045AA25 ,  2G045CB01 ,  2G045DA14 ,  4B063QA01 ,  4B063QA18 ,  4B063QQ52 ,  4B063QQ79 ,  4B063QR14 ,  4B063QR16 ,  4B063QR62 ,  4B063QS25 ,  4B063QX01 ,  4B063QX02