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J-GLOBAL ID：200902212400740800   整理番号：08A0638048

酵母Pichia pastorisにおけるフルタリン,α-D-ガラクトース結合ジャカリン関連レクチンの発現

Expression of frutalin, an α-d-galactose-binding jacalin-related lectin, in the yeast Pichia pastoris

著者 (6件)： OLIVEIRA Carla (IBB-Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Biological Engineering, Universidade do Minho, Campus ...) ,  FELIX Wagner (Departamento de Bioquimica e Biologia Molecular, Centro de Ciencias, Universidade Federal do Ceara, CE 60451-970, BRA) ,  MOREIRA Renato A. (Departamento de Bioquimica e Biologia Molecular, Centro de Ciencias, Universidade Federal do Ceara, CE 60451-970, BRA) ,  MOREIRA Renato A. (Centro de Ciencias da Saude, Universidade de Fortaleza, CE 60811-905, BRA) ,  TEIXEIRA Jose A. (IBB-Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Biological Engineering, Universidade do Minho, Campus ...) ,  DOMINGUES Lucilia (IBB-Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Biological Engineering, Universidade do Minho, Campus ...)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 60  号： 2  ページ： 188-193  発行年： 2008年08月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： フルタリンはパンノキの種子に発現されているα-D-ガラクトース結合レクチンである。植物からのその単離は時間がかかり,異なるレクチンアイソフォームの不均一な混合物をもたらす。パンノキレクチンの入手可能性を改善し,容易にするために,最適化したフルタリンをコードしている成熟配列をpPICZαA発現ベクターにクローンした。メチロトローフ酵母Pichia pastorisにおける蛋白質発現のためにデザインされた,この発現ベクターは組換え蛋白質を分泌経路へ導く,Saccharomyces α-因子プレプロ配列を含んでいる。可溶組換えフルタリンは培養上清中に検出され,天然のフルタリン抗体によって認識された。典型的な小スケールメタノール誘導培養から,サイズ排除クロマトグラフィーにより精製された,培養液リットル当り約18-20mgの組換えレクチンが得られた。SDS-PAGEとEdman分解解析は,αとβ鎖を結合している4つのアミノ酸リンカーペプチド「T-S-S-N」は開裂されなかったので,フルタリンは単鎖蛋白質として発現されたことを明らかにした。さらに,シグナル配列の不完全な処理は,α-因子プロ配列から導かれた,ひとつのGlu-Ala N端反復を持つ組換えフルタリンをもたらした。エンドグリコシダーゼ処理とSDS-PAGE解析は,組換えフルタリンは部分的にN-グリコシル化されていることを明らかにした。組換えレクチンのさらなる特性化は,それが天然のフルタリンより低い親和性を示しているけれども,単糖Me-α-ガラクトースと特異的に結合することを明らかにした。約62-64kDaの分子量を持つ組換えフルタリンはサイズ排除クロマトグラフィーカラムから溶出された。このことは,4量体構造を示唆しているが,これは,天然のフルタリンが起すウサギ赤血球凝集をしなかった。本研究は,ガラクトース結合ジャカリン関連レクチン4アミノ酸リンカーペプチド「T-S-S-N」は,酵母P.pastorisにおいて,いかなる蛋白質分解開裂も受けず,そして又,リンカー開裂がレクチン糖特異性に必須でないだろうということを示した。(翻訳著者抄録)

シソーラス用語： *レクチン ,  クワ科 ,  分泌タンパク質 ,  遺伝子発現 ,  *遺伝子操作 ,  グリコシル化 ,  翻訳後修飾 ,  サイズ排除クロマトグラフィー ,  アミノ酸配列 ,  四量体 ,  形質転換 ,  Pichia pastoris ,  パンノキ属 ,  ピキア属 ,  分子遺伝現象 ,  微生物 ,  酵母 ,  子嚢菌類酵母
準シソーラス用語： Pichia ,  *フルタリン

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  分子構造  (EB03020Y)

タイトルに関連する用語 (6件)： 酵母 ,  Pichia ,  d-ガラクトース ,  ジャカリン ,  レクチン ,  発現