柑橘3の異種発現とその組換え酵素の抗酸化活性を調べた。【JST・京大機械翻訳】

Jiang Hongbo; Feng Yingcai; Liu Shihuo; Wang Jinjun

文献

J-GLOBAL ID：201702214250481958 整理番号：17A0528922

柑橘3の異種発現とその組換え酵素の抗酸化活性を調べた。【JST・京大機械翻訳】

Heterologous Expression of PcSOD3 from Panonychus citri and the Anti-Oxidant Activity of Its Recombinant Enzyme

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資料名：
巻： 49 号： 24 ページ： 4735-4744 発行年： 2016年
JST資料番号： W1459A ISSN： 0578-1752 CODEN： CKNYAR 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

【目的】著者らの研究は,極端な 3が,極端な温度,ダニ,重金属,および紫外線ストレスの下で,柑橘3の発現を有意にアップレギュレーションすることを示し,PCSOD3は,環境ストレスに対するPCSOD3の生理的機能をさらに明らかにするために,本研究では,この遺伝子の異種発現および組換え型酵素の特性の解析を行った。【方法】PET28A-PCSOD3組換え発現プラスミドを構築し,大腸菌において異種発現を達成した。次に,NI3カラムをNI-NTAアフィニティークロマトグラフィーによって精製し,精製蛋白質をウエスタンブロットによって確認した。WST3の抗酸化活性を,WST-1法によって分析し,そして,種々の反応系のPHおよび前処理温度におけるPCSOD3の活性を測定した。形成,TERT-ブチルヒドロペルオキシドおよび過酸化水素の3種類の酸化剤を用いて,大腸菌細胞内で酸化ストレスを誘発し,これらの3種類の薬剤による過3大腸菌の抑制効果を,KIRBY-【結果】大腸菌BL21(DE3)におけるPCSOD3の発現に成功し,PCSOD3組換え蛋白質の最適誘導発現条件を研究した。誘導温度は18°C,回転速度は160R/MIN,OD値が0.6に達したときにIPTGを加え,最終濃度は0.4MMOL・L(-1),誘導時間は18Hであった。WESTERN BLOTの検証結果により、精製した組換えタンパク質はPCSOD3組換え型であり、組換えタンパク質の大きさは25.3KDであることが分かった。WST-1法によって得られたPCSOD3のフェノールオキシダーゼ活性はPH=7.0で最も高く,約47.3U/MG PROTEINであったが,前処理温度が25°Cのとき,PCSOD3の活性は40.2U/MGK-Bディスク拡散法を用いて薬剤感受性試験を行い、結果は形成が過剰発現したPCSOD3大腸菌に対する阻止円はいずれも空ベクター対照による阻止円より著しく小さく、測定により阻止円は対照150MMOL・L(-1)の過酸化水素の過剰発現は,大腸菌の3つの大腸菌に対する阻害率を約25%減少させた。しかし,濃度が200MMOL L(-1)の過酸化水素は,過剰発現発現3大腸菌に対する阻害率を約15%減少させた。[結論]PCSOD3の機能的発現は大腸菌において成功裏に達成され,PCSOD3組換蛋白質が精製された。PCSOD3の最適反応PH及び最適温度は生物化学的特性を示し,WST-1は法3蛋白質がIN VITROで顕著な抗酸化活性を持つことを示した。K-Bディスク拡散の法則は,PCSOD3を過剰発現する大腸菌の抗酸化能が著しく強化され,PCSOD3が抗酸化機能を持つことを示した。これらの結果は,PCSOD3が柑橘類の全の酸化損傷に重要な役割を果たすことを示した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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酵素一般 , 遺伝子操作

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