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J-GLOBAL ID：201702229503676977   整理番号：17A0109739

トリインフルエンザウイルスB1遺伝子のNS1蛋白質の原核発現,精製および熱安定性解析を行った。【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic Expression, Purification, and Thermal Stability Analysis of the Allele B NS1 Protein of Avian influenza virus

著者 (10件)： Luo Weiyu (College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology) ,  Hu Yonghao (College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University) ,  Zhang Jie (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Wang Jinguang (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Zhu Pengyang (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Liang Libin (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Zhou Yuan (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Li Chengjun (College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University) ,  Jiang Li (State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science) ,  Chen Hualan (College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology)
資料名： Nongye Shengwu Jishu Xuebao  (Nongye Shengwu Jishu Xuebao)
巻： 24  号： 10  ページ： 1482-1490  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2715A  ISSN： 1674-7968  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： A型インフルエンザウイルスの非構造タンパク質遺伝子(NON-STRUCTURAL PROTEIN, NS)は進化上に対立遺伝子AとBに分けられ、両者の間の相同性は70%より低い。NS1はインフルエンザウイルスが宿主免疫系に対抗する主な毒力因子の一つである。本研究は,配列アラインメントの分析に基づいている。本研究室で保存された4つのB遺伝子型鳥インフルエンザウイルス(AIV)(A/ 1256/12(H3N8),A/ENVIRONMENT/HUNAN/S4484/11(H12N7),A07/00(H5N1)およびA/DUCK/SHANGHAI/(H5N1))のNS1蛋白質を発現,精製した。そして,それらの安定性を分析した。まず第一に,ウイルスの全RNAを感染鶏胚から抽出し,特異的プライマーUNI12を用いてRT-PCRによって増幅し,次に,BAMH IとNOT Iによって消化し,次にそれをPGEX6P-1ベクターに挿入した。大腸菌(ESCHERICHIA COLI)BL21株において発現を誘導した。この蛋白質は精製過程において安定性が悪く、沈殿析出する。そのため、NS1蛋白截短突突然変異体(1M-202A、R38A41A)をさらに構築し、BL21菌株において発現を誘導した。GE HEALTH GLUTATHIONE SEPHAROSE 4Bアフィニティークロマトグラフィー、SOURCE Q陽イオン交換クロマトグラフィー及びHITRAP SUPERDEX75分子ふるいクロマトグラフィーにより、段階的に精製した。SDS-PAGEゲルの純度を分析し,OD320を測定し,蛋白質の熱安定性を分析した。結果は,4つのウイルスがすべての鳥インフルエンザウイルスのB1対立遺伝子群に属し,4つのウイルスのNS1蛋白質が,野生型,,突然変異体,および截短突突然変異体の段階的最適化によって,より高い発現を持つことを示した。最終的に,90%以上の純度の蛋白質サンプルを,段階的に精製し,そして,4つのウイルスにおけるA/DUCK/HUNAN/S(H3N8)NS1蛋白質の安定性は,最も良かった。本研究の結果は,分子構造と機能の更なる研究のための基礎データを提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 遺伝子型 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  SDS-PAGE ,  対立遺伝子 ,  病原性 ,  *熱安定性 ,  *ウイルス ,  相同性 ,  最適化 ,  *トリインフルエンザウイルス ,  RT-PCR法 ,  純度 ,  *インフルエンザウイルス ,  ベクター
準シソーラス用語： *NS1蛋白質 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Avian influenza virus ,  NS1 protein ,  Protein expression and purification ,  Thermal stability

分類 (2件)： ウイルスの生化学  (EG04030F) ,  ウイルス感染の生理と病原性  (EG04042Y)

タイトルに関連する用語 (7件)： トリインフルエンザウイルス ,  遺伝子 ,  NS1蛋白質 ,  発現 ,  精製 ,  熱安定性 ,  解析