抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】S(GSNO)によって誘発される内皮細胞のアポトーシスに及ぼすイカリイン(ICA)の効果を観察し,その機構を研究する。方法:内皮細胞株EA.HY926は浙江大学から提供され、細胞をランダムにサンプリングした。空白対照群、損傷群(GSNO群)、異なる濃度(高、中低濃度)のICA介入群(ICA群)及びプロテインキナーゼB(AKT)経路のタンパク質阻害剤LY294002は高、中、低濃度のICA群を抑制する。ブランク対照群はEA.であった。HY926細胞は96穴プレートで培養し、いかなる介入もしなかった。GSNO群はEA.であった。HY926細胞は48時間培養した後に1MMOL/L GSNOで処理した。高濃度,低濃度および低濃度のICA介入群は,24時間,それぞれ24時間,10ΜMOL/Lおよび0.1ΜMOL/LのICAで24時間培養し,1MMOL/LのGSNOで処理した。LY294002群の抑制率は高く,中程度の低濃度のICA群ではEA.%であった。【方法】24時間,96ΜMOL/Lの高濃度(10ΜMOL/L),中濃度(1ΜMOL/L),および低濃度(0.1ΜMOL/L)のICAによって処理したHY926細胞を,1ΜMOL/LのLY294002で処理した。24時間後に1MMOL/L GSNOを投与した。各群の細胞生存率を,MTT法によって測定した。乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)活性,マロンジアルデヒド(MDA)含有量,活性酸素種(ROS)活性およびミトコンドリア膜電位を,異なるキットによって測定した。ウエスタンブロット法により,リン酸化AKT(P-AKT),ヒト癌抑制蛋白質53(P53),チトクロームC(CYC),内皮一酸化窒素合成酵素(ENOS)/リン酸化ENOS(P-ENOS)およびプロ-3/CASPASE-3蛋白質発現を検出した。結果(1)各組のEA.HY926細胞の生存率;GSNO群の細胞生存率はブランク対照群より有意に低く(P<0.01)、高、中、低濃度のICA群はいずれもGSNO群より明らかに高かった(P<0.01)。(2)各群のEA.HY926細胞のLDH活性は以下の通りであった。GSNO群のLDH活性は対照群より有意に高かった[(142.65±5.56)U/L対(50.01±3.42)U/L,P<0.05]。しかし,高濃度および低濃度のICA群におけるそれらは,GSNO群におけるそれらより有意に低かった[(98.02±3.52),(105.29±6.89)および(117.16±4.27)U/L対(142.65±5.56)U/L,P<0.05]。LDH活性を低下させる効果は濃度依存的であった。(3)各群のEA.HY926細胞のMDA含有量を測定した。GSNO群のMDA含有量は対照群より有意に高かった[(11.14±0.37)NMOL/L対(5.21±0.18)NMOL/MG,P<0.05]。高,中および低濃度のICA群は,GSNO群のそれらより有意に低かった[(6.60±0.41),(6.83±0.21)および(8.29±0.07)NMOL/L,P<0.05]。(4)各群のEA.HY926細胞におけるROS活性は,以下の通りであった。GSNO群のROS活性は,対照群のそれより有意に高かった[(173.15±11.12)%対100%,P<0.05]。しかし,高濃度および低濃度のICA群においては,GSNO群のそれらより有意に低かった[(122.56±8.09)%,(134.52±9.09)%,(149.89±9.16)%対(173.15±11.12)%,P<0.05]。その中、高濃度のICA群は特に顕著であった。(5)各群のEA.HY926細胞のミトコンドリア膜電位;対照群と比較して,GSNO群のミトコンドリア膜電位は有意に増加した(0.84±0.04対0.12±0.04,P<0.05)。しかし,高濃度と低濃度のICAは,それぞれ,0.57±0.08,0.63±0.02,0.66±0.04対0.84±0.04(P<0.05)であった。(6)各群のEA.HY926細胞におけるAKT-AKTの発現は,以下の通りであった。対照群と比較して,GSNO群におけるP-AKT蛋白質の発現は有意に減少したが(P<0.05),高濃度および低濃度のICA群では,GSNO群よりも有意に高く(P<0.05),濃度依存的傾向を示した。しかし,LY294002の高濃度と低濃度のICA群のP-AKT蛋白質発現レベルは,GSNO群と比較して有意差がなかった。(7)各群のEA.HY926細胞の細胞質と核内のP53蛋白の発現は以下の通りであった。対照群と比較して,GSNO群と核群のP53蛋白質発現は有意に高く(P<0.05),一方,高濃度と低濃度のICA群は,GSNO群よりも有意に低かった(P<0.05)。LY294002の高濃度,中用量および低濃度のICA群の間には,有意差が全くなかった(P>0.05)。(8)各群のEA.HY926細胞のミトコンドリアと細胞質内のCYC、プロ-3とCASPASE-3タンパクの発現レベルを測定した。【結果】対照群と比較して,GSNO群におけるCYC蛋白質の発現は有意に減少したが(P<0.05),一方,細胞質では対照群より高かった(P<0.05)。高濃度と中濃度のICA群において,CYC蛋白質の発現レベルはGSNO群よりも高く(P<0.05),細胞質ではGSNO群よりも低く(P<0.05),低濃度群ではGSNO群と質群の間に有意差はなかった(P<0.05)。各-3とCASPASE-3蛋白質の発現レベルは,各群において類似していた。(9)各群のEA.HY926細胞におけるENOS/P-ENOS蛋白質発現は,以下の通りであった。対照群と比較して,GSNO群のP-ENOS蛋白質発現レベルに有意差は認められなかった。しかし,高濃度および低濃度のICA群におけるP-ENOS蛋白質の発現レベルは,GSNO群よりも有意に高かったが(P<0.05),異なる濃度群の間に有意差はなかった。しかし,LY294002群と対照群の間で,P-ENOS蛋白質発現に有意差はなかった(P<0.05)。【結語】ICAは,GSNOによって誘発される内皮細胞のアポトーシスを阻害することができ,その機序は,AKT経路を活性化することによって,P53活性を低下させる可能性があるData from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
