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J-GLOBAL ID：201702267690631139   整理番号：17A0656449

遺伝子組換えNEDD8リガーゼを用いる小分子蛋白質標的の直接近位タグ付け

Direct Proximity Tagging of Small Molecule Protein Targets Using an Engineered NEDD8 Ligase

著者 (4件)： HILL Zachary B. (Univ. California, California, USA) ,  POLLOCK Samuel B. (Univ. California, California, USA) ,  ZHUANG Min (Univ. California, California, USA) ,  WELLS James A. (Univ. California, California, USA)
資料名： Journal of the American Chemical Society  (Journal of the American Chemical Society)
巻： 138  号： 40  ページ： 13123-13126  発行年： 2016年10月12日 
JST資料番号： C0254A  ISSN： 0002-7863  CODEN： JACSAT  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 短報  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 生物活性小分子が標的とする蛋白質を同定することは困難であるという問題を解決するために,既に蛋白質-蛋白質相互作用を同定するために使用されている近位タグ付け酵素であるNEDD8 E2結合酵素Ubc12を応用して,生物活性小分子の蛋白質標的を同定する方法を開発した。NEDD8-Eに融合させたSNAP-タグを介して共有結合により小分子を結合させることにより2-ドメイン構築体を作製した。この構築体は,その小分子に結合した標的蛋白質をHis₆-ビオチンタグ付けNEDD8誘導体にて標識する。His₆-ビオチンタグはLC-MS/MSによる精製と標的蛋白質の同定を容易にする。この方法の有効性を実証するために,臨床使用されているチロシンキナーゼ阻害剤ダサチニブのSNAP-タグに結合可能な誘導体(DS1)を合成して小分子として使用し,A549細胞の溶解物中のダサチニブ標的の同定を試みた。NEDD8標識蛋白質をトリプシン分解後,LC-MS/MSにより分析した結果,4種の既知標的蛋白質を同定することができた。小分子としてメトトレキサートを用いて同様の検証実験を行なった。また合理的突然変異誘発によりNEDD標識化効率を改善した。遺伝子組換えリガーゼを用いる近位タグ付け法は標的の直接結合を用いることから,小分子標的の同定を容易にする有用で直交的な方法である。

シソーラス用語： *タンパク質 ,  組換タンパク質 ,  *ペプチドシンターゼ ,  *分子標的治療薬 ,  *ターゲティング ,  分子間相互作用 ,  ユビキチン活性化酵素 ,  行為 ,  LC-MS分析 ,  タンデム質量分析 ,  抗腫瘍薬 ,  酵素阻害剤 ,  A549細胞 ,  タンパク質分解 ,  変異誘発 ,  リガーゼ ,  *標識法 ,  アミノ酸 ,  脂肪族アミン ,  窒素複素環化合物 ,  芳香族アミン ,  芳香族カルボン酸 ,  脂肪族カルボン酸 ,  カルボアミド ,  アミノカルボン酸 ,  第三アミン ,  カルボン酸 ,  ビタミンB群 ,  ウレア化合物 ,  硫黄複素環化合物
準シソーラス用語： *NEDD8 ,  *ユビキチンリガーゼ ,  *小分子阻害剤 ,  *蛋白質標的 ,  生物活性化合物 ,  蛋白質-蛋白質相互作用 ,  Ubc12 ,  タグ付 ,  SNAP ,  LC/MS/MS ,  チロシンキナーゼ阻害剤 ,  A549 ,  トリプシン消化 ,  突然変異誘発 ,  *標識化

分類 (4件)： 生化学的分析法  (EA03030G) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  質量分析  (CC03013N)

物質索引 (3件)： ダサチニブ ,  メトトレキサート ,  ビオチン

タイトルに関連する用語 (6件)： 遺伝子組換え ,  NEDD8 ,  リガーゼ ,  小分子 ,  蛋白質標的 ,  タグ付け