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J-GLOBAL ID：201702269427521897   整理番号：17A0297781

抗B7-H4単鎖抗体ライブラリーの構築とスクリーニング及び抗体特異性の同定【JST・京大機械翻訳】

Construction of anti-B7-H4-scFv library and screening and identification of anti-B7-H4-scFv

著者 (7件)： Shao Luanluan (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology) ,  Xu Chaochao (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology) ,  Ji Hongshuai (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology) ,  Mao Weiping (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology) ,  Wang Yingying (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory for Supramolecular Medicine Materials and Applications) ,  Liu Xiaoqian (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology) ,  Zhu Yanyan (College of Life Scienses,Nanjing Normal University, Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Biotechnology)
資料名： Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi  (Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi)
巻： 32  号： 9  ページ： 1260-1266  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2523A  ISSN： 1007-8738  CODEN： XFMZFM  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】マウス抗B7-H4細胞外ドメインリボソームディスプレイ(SCFV)ライブラリーを構築し,特異性の高い抗体をスクリーニングする。【方法】B7-H4細胞外ドメイン遺伝子をA549細胞のCDNAから増幅し,原核生物発現ベクターPET-28A(+)に挿入し,B7-H4細胞外ドメインを精製し,BALB/Cマウスを免疫化した。全RNAを免疫マウスの脾臓から抽出した。出重Lian(V_H),軽鎖可変領域(V_Κ),VH接合部(V_H-リンカー)およびと(V_Κ-リンカー)配列を,逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)によって増幅した。重軽Lianの可変領域遺伝子の連結産物V_H/V_Κを得た。V_H/V_ΚはPUM19-Tベクターと連結し,Eに変換した。E.COLI DH5Α受容体は態菌株で,コロニーPCRにより同定し配列決定した。TNT?を使用した。T7 QUICK FOR PCR DNAキットを用いて構築した抗体ライブラリに対して体外翻訳とスクリーニングを行い、WESTERN BLOT法と間接ELISAを用いて得られた抗体に対して特異性鑑定を行った。【結果】生物学的配列決定により,配列の正確な重鎖可変領域(V_H),軽鎖可変領域(V_Κ)および二つの連結産物(V_H/V_Κ)が得られ,サイズはそれぞれ439BP,680BPおよび1098BPであった。特異的実験分析により得られた抗体ライブラリーからスクリーニングした抗体はB7-H4と高い特異性を示した。【結論】B7-H4細胞外ドメインのリボソームディスプレイライブラリーを首尾よく構築し,B7-H4細胞外ドメインにおける組換え蛋白質の高特異的結合のための標的SCFVをスクリーニングした。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 組換タンパク質 ,  ベクター ,  *抗体 ,  DNA【核酸】 ,  重鎖 ,  脾臓 ,  軽鎖 ,  ELISA ,  RT-PCR法
準シソーラス用語： *抗体ライブラリー ,  リンカ ,  可変領域 ,  *特異性 ,  リボソームディスプレイ ,  エクトドメイン , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： B7-H4 ,  extracellular domain ,  single chain antibody ,  ribosome display ,  recombinant protein

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  ウイルスによる植物病害  (FC04054G)

タイトルに関連する用語 (6件)： 単鎖抗体 ,  ライブラリー ,  構築 ,  スクリーニング ,  抗体特異性 ,  同定