内因性ハンチンチン蛋白質の分解を測定するための大量処理適合性分析法【Powered by NICT】

Wu Peng; Lu Mingxing; Cui Xiaotian; Yang Heqing; Yu Shenliang; Zhu Jianbin; Sun Xiaoli; Lu Boxun

文献

J-GLOBAL ID：201702280512064108 整理番号：17A0199283

内因性ハンチンチン蛋白質の分解を測定するための大量処理適合性分析法【Powered by NICT】

A high-throughput-compatible assay to measure the degradation of endogenous Huntingtin proteins

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資料名：
巻： 37 号： 10 ページ： 1307-1314 発行年： 2016年
JST資料番号： C0089D ISSN： 1671-4083 CODEN： APSCG5 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：英語 (EN)

目的:病原蛋白質の蓄積は多くの神経変性疾患の共通の特徴である。高処理適合分析を用いてそのような蛋白質の分解の測定は,分解の遺伝的および化学的調節因子の同定のための高度に望まれている。例えば,ハンチントン病(HD)はハンチンチン蛋白質(mHTT)の細胞毒性を原因とする不治の遺伝性神経変性疾患である。mHTT分解の高スループット測定は,HD薬物発見と研究において重要である。そのような目的のための既存の方法は,蛋白質タグまたはパン蛋白質合成阻害剤へのそれらの依存性のために限界がある。ここでは,クリック化学と均一時間分解蛍光(HTRF)技術に基づく内因性無標識ハンチンチン蛋白質(HTT)分解の測定のための高処理適合パルスチェイス法(CH追跡)を報告した。【方法】パルス標識蛋白質はクリック反応歪み促進アルキン-アジド環状付加(SPAAC)を用いてビオチンと抱合し,追跡信号はストレプトアビジンビーズによるプルダウン後HTT HTRF信号の減少率を測定することにより算出した。【結果】,信号は,線形検出範囲内であり,HTT特異的であったことを確認した。96穴プレートを用いた高処理適合フォーマットにおける内因性HTTの分解を測定することに成功した。で知られている調節因子によるHTT分解の予測された変化が観察され,これはアッセイはHTT分解改質剤の同定に適していることを確認した。【結論】内因性,無標識HTT分解を測定すること,HD研究と創薬のための有用なツールを提供できる最初の高処理適合分析を確立した。法は他の蛋白質に適用でき,他の神経変性疾患と蛋白質症に関する研究を容易にすることができる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

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神経の基礎医学

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