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J-GLOBAL ID：201702282001672425   整理番号：17A0109783

牛支ΑおよびとΒ遺伝子のクローニング,原核発現および細胞内局在化は,牛支において検出された。【JST・京大機械翻訳】

Cloning and Prokaryotic Expression of pdha and pdhβ Genes from Mycoplasma bovis and Its Subcellular Localization

著者 (9件)： Su Weide (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Li Na (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Xue Huiwen (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Xing Xiaoyong (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Hao Baocheng (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Fu Xiaoping (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Wen Fengqin (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Xiang Haitao (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University) ,  Bao Shijun (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University)
資料名： Nongye Shengwu Jishu Xuebao  (Nongye Shengwu Jishu Xuebao)
巻： 24  号： 4  ページ： 567-575  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2715A  ISSN： 1674-7968  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： (MYCOPLASMA BOVIS, M.B)はウシ(BOS TAURUS)の重要な病原性マイコプラズマであり、感染後に牛の多種の疾病を引き起こすことができる。ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体EL(PYRUVATE DEHYDROGENASE EL, PDHC EL)は生物代謝物の代謝過程に参与する律速酵素であり、微生物、哺乳動物及び高等植物に広く存在している。それはピルビン酸のアセチル補酵素への変換に直接影響する。本研究では、GENBANKにおけるM.B PG45株のPDHC EΑサブユニット遺伝子PDHΑとPDHC ELΒ基のPDHΒ配列によりプライマーを設計した。M.B ((GENBANK受入番号:KUKU)とPDHΒ遺伝子(GENBANK受入番号:KU355296)をPCRにより増幅した。配列決定に基づき,オーバーラップPCR(OVERLAP PCR)技術を用いて遺伝子を最適化し,原核生物発現プラスミドPET-PDHΑとPET-PDHΒを構築した。発現プラスミドは大腸菌(ESCHERICHIA COLI)BL21(DE3)に形質転換し,組換えPDHC EΑサブユニット融合蛋白質PDHAおよびと E1Β1基をIPTGにより誘導した。発現産物を精製し,ニュージーランドウサギ(ORYCTOLAGUS CUNICULUS)に免疫し,ポリクローナル抗体を調製した。さらに、WESTERN BLOT及び酵素結合免疫吸着試験(ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY, ELISA)を用いて、M.B PDHC ELΑサブユニットとPDHC ELΒサブユニットの細胞内分布について初歩的な研究を行った。結果により、IPTGの誘導とPDHΒ遺伝子は大腸菌BL21(DE3)においていずれも成功に発現し、組換えタンパク質RPDHAとRPDHBの分子量はそれぞれ約40と37KDであり、いずれも良好な免疫原性があることが分かった。WESTERN BLOTとELISAの結果により、ELAとE1Βは牛のマイコプラズマ細胞膜上と細胞質中にいずれも分布しており、量が相当することが証明された。本研究の結果は,M.Bの生物学的機能の更なる研究のための基礎データを提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ELISA ,  ポリクローナル抗体 ,  代謝産物 ,  病原性 ,  分子量 ,  形質転換 ,  補酵素 ,  細胞内分布 ,  *プラスミド ,  免疫原性 ,  融合タンパク質 ,  サブユニット ,  脂肪族ケトン ,  脂肪族カルボン酸 ,  ケト酸
準シソーラス用語： 大腸菌BL21(DE3) ,  *クローニング , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Mycoplasma bovis (M.b) ,  Pyruvate dehydrogenase ,  Prokaryotic expression ,  Localization in membrane

分類 (5件)： 代謝と栄養  (EG03054K) ,  微生物代謝産物の生産  (FK03020A) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  酵素の応用関連  (EB09100B) ,  酵素一般  (EB09010D)

物質索引 (1件)： ピルビン酸

タイトルに関連する用語 (5件)： 牛 ,  遺伝子 ,  クローニング ,  発現 ,  細胞内局在