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J-GLOBAL ID：201702266867913581   整理番号：17A0077934

コナヒョウヒダニの13.8KDAリゾチームのクローン発現,精製同定およびバイオインフォマティクス解析を行った。【JST・京大機械翻訳】

Cloning and expressing the Dermatophagoides farinae 13.8kDa lysozyme(Bac)gene,purifying and identifying the protein allergenicity and analysis of the Bac protein

著者 (6件)： Liang Zhilin (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University) ,  Liu Zhigang (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University) ,  Wu Yulan (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University) ,  Chen Simin (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University) ,  Yang Pingchang (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University) ,  Liu Xiaoyu (Institute of Allergy and Immunology,Shenzhen University)
資料名： Zhongguo Renshougonghuanbing Xuebao  (Zhongguo Renshougonghuanbing Xuebao)
巻： 32  号： 9  ページ： 779-783,788  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2253A  ISSN： 1002-2694  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】粉塵 13.8 13.8(13.8)の13.8(13.8)遺伝子をクローン化し,蛋白質の過剰発現を同定し,生物情報学的分析を行う。方法:グルココルチコイドの純粋培養のコナヒョウヒダニを抽出し、総RNAを抽出し、既知の遺伝子配列に基づいてプライマーを設計し、RT-PCRによりBAC遺伝子フラグメントを増幅し、産物をPMD-32Tベクターに挿入した。増幅後,制限酵素ECORIとXHOI二重消化により,標的遺伝子フラグメントをPET-44A発現ベクターに接続し,大腸菌BL21(DE3)に形質転換し,IPTGにより誘導した。組換えBAC蛋白質の特異的過剰発現を間接ELISAによって検出した。CLUSTALW2は相同性解析を行い,MEGA5ツールボックスは系統樹を構築し,PROTPARAM TOOLSはその物理化学的性質を予測し,PSIPREDはその二次構造を予測し,SWISS-MODELはその3構造を予測した。ネットワークにおける相関ソフトウェアととを用いて,BAC蛋白質T細胞エピトープを予測した。BACのB細胞エピトープをDNASTARで予測した。結果:配列決定により、本研究では、粉塵のBAC遺伝子をクローニングし、そのオープンリーディングフレームは396BPであり、131組のアミノ酸をコードすることが分かった。BAC遺伝子を大腸菌BL21(DE3)に導入し,IPTGにより誘導した後,組換え蛋白質を効率的に発現させた。この蛋白質は主に可溶性で存在し,蛋白質の分子量は約14KDAであった。間接ELISA法により、BACは粉塵 患者の血清IGEと結合できることが証明された。配列決定により、本実験室でクローニングした粉塵のBAC遺伝子とGENBANKで公表されたGENBANK KF113885.1の相同性は96%であることが分かった。系統樹の結果により、粉塵ダニとヤケヒョウヒダニの近縁関係が比較的に近いことが示された。物理化学的性質の予測はBAC蛋白質が比較的安定であることを示した。二次構造と三次構造予測結果により、BACの構造は主にランダムコイルなしで構成されることが分かった。T細胞エピトープ予測は4つのペプチド配列(6-14,38-46,85-99,122-130)を得た。6つのペプチド配列(15-30,26-40,44-59,58-73,95-110,101-116)をB細胞エピトープによって予測した。【結語】粉塵を首尾よくクローン化し,発現させ,組換えBAC蛋白質は良好な免疫原性を持ち,ダニアレルゲンの構造成分と物理化学的性質の更なる研究のための理論的基礎を提供する。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： アミノ酸配列 ,  組換タンパク質 ,  形質転換 ,  RT-PCR法 ,  血清 ,  系統樹 ,  免疫原性 ,  *クローン ,  ELISA ,  ベクター ,  相同性 ,  アミノ酸
準シソーラス用語： 物理化学的性質 ,  粉塵 ,  *バイオインフォマティクス , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Dermatophagoides farina ,  13.8kDa lysozyme(Bac) ,  expression ,  immune identification ,  bioinformatics

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (7件)： コナヒョウヒダニ ,  リゾチーム ,  クローン ,  発現 ,  精製 ,  同定 ,  バイオインフォマティクス解析