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J-GLOBAL ID：201702263171778440   整理番号：17A0105572

大腸菌における好熱性細菌細菌 プルラン TMPの原核発現と酵素学的性質を調べた。【JST・京大機械翻訳】

Pronucleus Expression and Characterization of Thermotoga lettingae TMO Pullulanase TMP in Recombinant Escherichia coli

著者 (6件)： Wei Tao (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry) ,  Chi Lei (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry) ,  Yu Xuan (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry) ,  Zhang Jianhua (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry) ,  Liu Kun (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry) ,  Mao Duobin (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry)
資料名： Zhongguo Shipin Xuebao  (Zhongguo Shipin Xuebao)
巻： 16  号： 8  ページ： 16-22  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2780A  ISSN： 1009-7848  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)技術を用いて,熱 TMPから熱(TMP_1262)を増幅し,発現ベクターPET15Bにクローン化した。IPTG誘導により,大腸菌BL21-CODENPLUS(DE3)-RILに可溶性発現を誘導した。組換え酵素を,80°Cの熱処理とNI-NTAアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。SDS-PAGE分析は以下のことを示した。この酵素の分子量は97.0 KUであった。酵素特性の研究により、この酵素の最適反応温度は90°C、最適PHは5.4であることが分かった。最適反応温度は90°Cで150分処理し,酵素活性は80%以上であった。プルランTMPは強い耐酸性性を持ち,90°Cで高温とPH5.0の酸性条件で20時間処理すると50%以上の活性を保持した。この酵素は金属イオンと変性剤SDS、尿素、TWEEN80とTRTION-X100に対して一定の抵抗性がある。還元剤DTT(0.5,5MMOL/L)はこの酵素活性に対して明らかな活性化作用を持ち、それぞれ酵素活性を18%と28%向上させた。これらの結果に基づき,ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いて,プルラン TMP突然変異体C501S,C649SおよびC704Sを構築した。速度論的解析により,突然変異体C649Sの可溶性澱粉および可溶性澱粉基質の効率(K_(CAT)/K_M)は,野生型と比較して,それぞれ37.8%および40.8%増加した。これらの結果は,C649部位がプルランのTMP触媒機能に密接に関連している可能性があることを示唆する。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： SDS-PAGE ,  酵素活性度 ,  可溶性 ,  *高温菌 ,  金属イオン ,  *酵素 ,  PCR法 ,  可溶性澱粉 ,  耐酸性 ,  分子量 ,  基質 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  *プルラン ,  反応温度 ,  溶解性 ,  ウレア化合物

著者キーワード (4件)： pullulanase ,  cloning and expression ,  enzymatic property ,  site-directed mutant

分類 (1件)： 酵素一般  (EB09010D)

物質索引 (1件)： 尿素

タイトルに関連する用語 (8件)： 大腸菌 ,  好熱性細菌 ,  細菌 ,  プルラン ,  TMP ,  発現 ,  酵素学 ,  性質