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J-GLOBAL ID：201202267477105690   整理番号：12A1067703

Pyrococcus horikoshii由来の活性型ジアセチルキトビオースデアセチラーゼの発現,再折畳み及び精製

Expression, refolding, and purification of active diacetylchitobiose deacetylase from Pyrococcus horikoshii

著者 (5件)： MINE Shouhei (National Inst. of Advanced Industrial Sci. and Technol. (AIST), 1-8-31 Midorigaoka, Ikeda, Osaka 563-8577, JPN) ,  IKEGAMI Takahisa (Inst. for Protein Res., Osaka Univ., 3-2 Yamadaoka, Suita, Osaka 565-0871, JPN) ,  KAWASAKI Kazunori (National Inst. of Advanced Industrial Sci. and Technol. (AIST), 1-8-31 Midorigaoka, Ikeda, Osaka 563-8577, JPN) ,  NAKAMURA Tsutomu (National Inst. of Advanced Industrial Sci. and Technol. (AIST), 1-8-31 Midorigaoka, Ikeda, Osaka 563-8577, JPN) ,  UEGAKI Koichi (National Inst. of Advanced Industrial Sci. and Technol. (AIST), 1-8-31 Midorigaoka, Ikeda, Osaka 563-8577, JPN)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 84  号： 2  ページ： 265-269  発行年： 2012年08月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 超好熱性古細菌Pyrococcus furiosus由来のキチナーゼはキチンを分解して,最終産物としてジアセチルキトビオース[(GlcNAc)₂]を産生する。Pyrococcus spp.における(GlcNAc)₂の分解機構を更に調べるため,Thermococcus kodakaraensisのジアセチルキトビオースデアセチラーゼと相同性蛋白質をコードする,P.horikoshii由来のPH0499遺伝子をクローニングした。大腸菌Rosetta(DE3)pLysで封入体として,デアセチラーゼ(Ph-Dac)を過剰発現させた。不溶性封入体を可溶化させ,再折畳み手法によって再活性化させた。いくつかの精製工程を経て,培養液1Lから可溶性で,温度安定な(80°Cまで)Ph-Dacを取得した。再折畳みPh-Dacの見掛けの分子量は180kDaで,ホモ六量体であることを示した。再折畳みPh-Dacは又(GlcNAc)₂に対しデアセチラーゼ活性を示し,脱アセチル化部位は(GlcNAc)₂の非還元末端残基に特異的であることが明らかになった。この発現及び精製系はPh-Dacの更なる特性化に有用である。Copyright 2012 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *古細菌 ,  遺伝子発現 ,  精製 ,  遺伝子 ,  遺伝子クローニング ,  大腸菌 ,  キチン ,  *アミドヒドロラーゼ ,  分子量 ,  六量体 ,  封入体 ,  *Pyrococcus horikoshii ,  *デアセチラーゼ ,  大腸菌BL21(DE3) ,  蛋白質精製 ,  タンパク質リフォールディング ,  *微生物 ,  分子遺伝現象
準シソーラス用語： PH0499遺伝子 ,  蛋白質再折畳み

分類 (3件)： 微生物の生化学  (EG03020N) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  酵素一般  (EB09010D)

物質索引 (1件)： N,N′-ジアセチルキトビオース

タイトルに関連する用語 (4件)： Pyrococcus ,  活性 ,  折畳み ,  精製