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J-GLOBAL ID：200902298758710360   整理番号：08A0625293

in situの特異的蛋白質に対する蛍光エネルギー移動に基づく機械ストレスセンサ

A fluorescence energy transfer-based mechanical stress sensor for specific proteins in situ

著者 (3件)： MENG Fanjie (State Univ. New York at Buffalo, NY, USA) ,  SUCHYNA Thomas M. (State Univ. New York at Buffalo, NY, USA) ,  SACHS Frederick (State Univ. New York at Buffalo, NY, USA)
資料名： FEBS Journal  (FEBS Journal)
巻： 275  号： 12  ページ： 3072-3087  発行年： 2008年06月 
JST資料番号： B0206B  ISSN： 1742-464X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 機械ストレスをリアルタイムに測定するために,構造蛋白質ホスト内に挿入できる蛍光エネルギー移動(FRET)カセットを設計し,stFRETと命名した。このプローブは安定なα-ヘリックスにより連結された緑色蛍光蛋白質対(CeruleanとVenus)からなる。この遊離カセット蛋白質のFRET効率をリンカーの長さ,フルオロホアの角度,温度と尿素変性,及びプロテアーゼ処理の関数として測定した。連結ヘリックスは80°Cまで安定であり,8M尿素中で変性し,プロテアーゼにより急速に消化されるが,いずれの場合にも,フルオロホアは影響を受けなかった。α-ヘリックスリンカーの残基を加えたり引いたりして,ドナーとアクセプターの間の角度と距離を変化させ,カセットが剛体であると仮定して,そのジオメトリーを計算した。等二軸伸長させたゴムシートに両末端を連結させることによりStFRETの歪み感受性を試験した。裸のカセットがヒト胚腎臓293細胞内においてうまく発現され,核内に濃縮された。このカセットをα-アクチニン,非赤血球スペクトリン,及びフィラミンAのようなホスト蛋白質中に局在させると,標識されたホストがうまく発現し,3T3細胞系において正常に分布した。それらは遊走細胞の先導端において圧迫され,トレイリング端において弛緩した。コラーゲン-19は中央付近をstFRETにより標識すると,Caenorhabditis elegansにおいてうまく発現され,末端緑色蛍光蛋白質により標識されたホストに同様にして分布し,その虫は正常に挙動した。

シソーラス用語： *機械刺激 ,  実時間処理 ,  *蛍光共鳴エネルギー移動 ,  *緑色蛍光タンパク質 ,  *バイオセンサ ,  変性 ,  ヘリックス構造 ,  HEK293細胞 ,  細胞核 ,  蛍光標識 ,  アクチニン ,  スペクトリン ,  アクチン結合タンパク質 ,  *剪断応力 ,  共焦点顕微鏡 ,  αアクチニン ,  フィラミンA ,  C.エレガンス ,  *タンパク質 ,  血液タンパク質 ,  動物タンパク質 ,  血液成分 ,  成分 ,  桿線虫類 ,  無脊椎動物
準シソーラス用語： Caenorhabditis elegans ,  Cerulean蛋白質 ,  Venus蛋白質

分類 (2件)： 生物物理的研究法  (EA03020V) ,  動物に対する影響  (EE04040K)

タイトルに関連する用語 (4件)： 蛋白質 ,  蛍光 ,  エネルギー移動 ,  ストレス