標的分子のリガンドをスクリーニングする方法

発明者： , , , , , ,
出願人/特許権者：
代理人 (1件)：太田恵一
公報種別：公表公報
出願番号（国際出願番号）：特願2003-505589
公開番号（公開出願番号）：特表2004-537047
出願日： 2002年06月13日
公開日（公表日）： 2004年12月09日
要約：

本発明は、標的分子のリガンドについてスクリーニングする方法を提供する。本発明の方法は、標的分子を変性条件に付し、標的のアンフォールディングに対する感受性を改変する能力について化合物をスクリーニングするアッセイを含む。本発明の方法は、標的分子のアンフォールディングの程度を決定するために、蛍光検出を用いる。本発明のいくつかの態様において、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を検出する。本発明の他の態様において、蛍光偏光(FP)を検出する。好ましい実施形態において、標的タンパク質のような標的分子を、試験化合物の存在下において、標的分子の少なくとも一部がアンフォールディングする、TATLASと呼ぶ温度まで加熱する。本発明のいくつかの実施形態において、標的分子のアンフォールディングの程度は、FRETに関与することができるフルオロフォアにカップリングする標的分子のアンフォールド形態に特異的な特異的結合メンバーの結合によって、決定する。本発明のいくつかの他の実施形態において、標的分子のアンフォールディングの程度は、標的分子の凝集体のFRET検出によって決定する。本発明のさらに他の実施形態において、標的分子のアンフォールディングの程度は、標的分子の凝集体の蛍光偏光の検出によって決定する。本発明は、標的のアイデンティティーまたは機能に依存しない標的分子のリガンドを同定するための、高感度なハイスループットスクリーニングを提供する。

請求項（抜粋）：

(a)溶液中の標的分子を一以上のウェル中に供し; (b)前記一以上のウェルに一以上の試験化合物を添加して、標的分子および一以上の試験化合物を含む一以上の試験ウェルを供し; (c)前記標的分子のアンフォールド形態に特異的に結合する第一の特異的結合メンバーを、前記一以上の試験ウェルに添加し、ここで、前記第一の特異的結合メンバーは、FRETドナーまたはFRETアクセプターを含むか、あるいはFRETドナーまたはFRETアクセプターに直接的または間接的に結合することができ; (d)前記標的分子の少なくとも一部が変性する条件に、前記一以上の試験ウェルを付し; (e)前記第一の特異的結合メンバーの結合部位とは別の部位において前記標的タンパク質に結合できる第二の特異的結合メンバーを、前記一つ以上の試験ウェルに添加し、ここで;前記第一の特異的結合メンバーがFRETドナーフルオロフォアを含むか、あるいはそれに直接的または間接的に結合できる場合、前記第二の特異的結合メンバーはFRETアクセプターを含むか、あるいはそれに直接的または間接的に結合でき、そして前記第一の特異的結合メンバーがFRETアクセプターを含むか、あるいはそれに直接的または間接的に結合できる場合、前記第二の特異的結合メンバーはFRETドナーを含むか、あるいはそれに直接的または間接的に結合でき; (f)前記試験ウェルからの一つ以上の波長での蛍光発光を測定し; (g)前記一つ以上の試験ウェルの一つ以上の波長での蛍光発光と一つ以上の基準値との比較を行い; (h)工程(g)における前記比較を用いて、前記標的分子が、前記一つ以上の試験ウェル中で、アンフォールド状態、フォールド状態、または双方で存在する程度を決定し;次いで、 (i)パート(h)における決定を用いて、前記一つ以上の試験化合物が前記標的分子に結合するか否かを決定し、それにより、前記標的分子の一つ以上のリガンドを同定する; 工程を含むことを特徴とする、標的分子に結合する一つ以上のリガンドを同定するためのスクリーニング方法。

IPC (7件)：

G01N33/50 , G01N21/78 , G01N33/15 , G01N33/53 , G01N33/536 , G01N33/542 , G01N33/566

FI (8件)：

G01N33/50 Z , G01N21/78 C , G01N33/15 Z , G01N33/53 D , G01N33/53 U , G01N33/536 D , G01N33/542 A , G01N33/566

Fターム (21件)：

2G045AA40 , 2G045BB50 , 2G045BB51 , 2G045DA36 , 2G045FA11 , 2G045FA15 , 2G045FB03 , 2G045FB07 , 2G045FB12 , 2G045GC15 , 2G045JA01 , 2G054BB13 , 2G054CA23 , 2G054CB02 , 2G054CB03 , 2G054CE02 , 2G054EA03 , 2G054EB02 , 2G054GA04 , 2G054GA06 , 2G054GB02

引用特許：

審査官引用 (5件)

特開平3-188374
抗体による蛋白質構造の評価方法
公報種別：公開公報出願番号：特願平7-202011 出願人：株式会社日立製作所
核酸の新規合成を検出する方法
公報種別：公開公報出願番号：特願平11-203576 出願人：株式会社分子バイオホトニクス研究所

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