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J-GLOBAL ID：201402243617337756   整理番号：14A0057612

PCR阻害物質で生じる偽陰性結果を排除する高感度テロメラーゼ活性アッセイ

A Highly Sensitive Telomerase Activity Assay that Eliminates False-Negative Results Caused by PCR Inhibitors

著者 (5件)： YAKU Hidenobu (Panasonic Corp., Kyoto, JPN) ,  YAKU Hidenobu (Konan Univ., Kobe, JPN) ,  MURASHIMA Takashi (Konan Univ., Kobe, JPN) ,  MIYOSHI Daisuke (Konan Univ., Kobe, JPN) ,  SUGIMOTO Naoki (Konan Univ., Kobe, JPN)
資料名： Molecules (Web)  (Molecules (Web))
巻： 18  号： 10  ページ： 11751-11767 (WEB ONLY)  発行年： 2013年10月 
JST資料番号： U7014A  ISSN： 1420-3049  CODEN： MOLEFW  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： スイス (CHE)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 磁気ビーズ(MB)上での非対称ポリメラーゼ連鎖反応(A-PCR)によるテロメアーゼ活性のアッセイとその後のサイクリングプローブ技術(CPT)の適用を記載する。このアッセイで,テロメラーゼ反応生成物はMB上に固定化されるが,生成物はその後臨床的試料で一般に見いだされるPCR阻害物質を除去するためにその後洗浄される。テロメラーゼ反応生成物のグアニンリッチ配列(5′-(TTAGGG)n-3′)は,A-PCRにより選択的に増幅され,その後増幅生産物はCPTを通して検出されるが,5′末端にフルオロホアを3′末端に消光剤を持つプローブRNAは標的DNA存在下,RNアーゼHで加水分解される。このプローブRNAの触媒媒介性切断は5′末端プローブ由来の蛍光を増強する。本アッセイは,正常なヒト皮膚線維芽(NHDF)細胞よりHeLa細胞を選択的に効率よく検出することを可能にした。重要なことに,この選択性は過剰なNHDF細胞の欠如と存在下でのHeLa細胞検出に関して同一の結果を生じことから,このアッセイは実際の臨床応用に利用できる。HeLa細胞の下限検出限界は50細胞であり,この値は従来のテロメアのリピート増幅プロトコルアッセイより低い。また,本アッセイはPCR阻害物質による偽陰性結果を除去した。さらに,このアッセイがテロメラーゼ活性阻害を見いだすためにグアニン四重鎖リガンド間のスクリーニングに適していることを示す。(翻訳著者抄録)

シソーラス用語： *臨床検査 ,  *テロメラーゼ ,  酵素活性度 ,  誤診 ,  *PCR法 ,  粒状材 ,  *酵素阻害剤 ,  反応生成物 ,  ヒト ,  線維芽細胞 ,  HeLa細胞 ,  検出限界 ,  立体配座 ,  スクリーニング ,  皮膚線維芽細胞 ,  G-四重鎖 ,  磁性ビーズ ,  誤り
準シソーラス用語： *PCR阻害剤 ,  グアニン四重鎖 ,  偽陰性反応 ,  磁気ビーズ ,  生物医学応用

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (7件)： PCR ,  阻害物質 ,  偽陰性 ,  排除 ,  高感度 ,  テロメラーゼ活性 ,  アッセイ