ルシフェラーゼ-フラグメント相補を用いた特異的阻害剤の解析のためのミトコンドリアへのp53転座の動的モニタリング【Powered by NICT】

Noda Natsumi; Awais Raheela; Sutton Robert; Awais Muhammad; Ozawa Takeaki

文献

J-GLOBAL ID：201702282405959674 整理番号：17A1818117

ルシフェラーゼ-フラグメント相補を用いた特異的阻害剤の解析のためのミトコンドリアへのp53転座の動的モニタリング【Powered by NICT】

Dynamic monitoring of p53 translocation to mitochondria for the analysis of specific inhibitors using luciferase-fragment complementation

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資料名：
巻： 114 号： 12 ページ： 2818-2827 発行年： 2017年
JST資料番号： D0019A ISSN： 0006-3592 CODEN： BIBIAU 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

細胞内蛋白質輸送は複雑な生物学的過程の調節において重要な役割,細胞死を含むを果たしている。腫瘍抑制因子p53は壊死性細胞死を促進するミトコンドリアマトリックスへのサイトゾルからの移行もDNA損傷と酸化ストレスにより活性化される転写因子である。しかし,p53ミトコンドリア転移の特異的阻害剤であるほとんど知られていない。p53の阻害剤を探索するために,ルシフェラーゼ断片相補性アッセイを用いてサイトゾルからミトコンドリアへのp53転移を監視するための生物発光プローブを開発した。プローブは新規対ルシフェラーゼフラグメントの,グリーンコメツキムシルシフェラーゼCBG68(CBGN)と多重補体ルシフェラーゼフラグメント(McLuc1)のN末端から構成されている。ルシフェラーゼフラグメントの組合せは顕著なルミネセンス強度と高い信号対バックグラウンド比を示した。McLuc1に関連したp53はミトコンドリアマトリックスへのサイトゾルから移動するとき,ミトコンドリアマトリックスにおけるCBGNはMcLuc1を補完し,ルミネセンスの回復が起こることを可能にする。ルミネセンス強度はCBGNとMcLuc1の相補後の過酸化水素誘発酸化ストレス下で有意に増加した。p53ミトコンドリア転移の選択的阻害剤,ピフィスリンμは濃度依存的にp53プローブのミトコンドリア転移を抑制した。さらに,高いルミネセンス強度は,生物発光顕微鏡下で単一細胞レベルでのp53転移を可視化を容易にする。p53ミトコンドリア転移アッセイは新規なp53阻害剤,壊死性細胞死が主な原因である疾患の治療薬として開発される可能性を同定するためのハイスループットスクリーニングのための新しいツールである。Copyright 2017 Wiley Publishing Japan K.K. All Rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

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動物組織・細胞による物質生産 , 遺伝子操作 , 細胞生理一般

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